蒽酮法测定植物干样中可溶性糖的详细步骤,有实践经验的更好,标准曲线用蔗糖还是葡萄糖有区别吗

蒽酮法测定植物干样中可溶性糖的详细步骤,有实践经验的更好,标准曲线用蔗糖还是葡萄糖有区别吗
蒽酮法测定植物干样中可溶性糖的详细步骤,有实践经验的更好,
标准曲线用蔗糖还是葡萄糖有区别吗

蒽酮法测定植物干样中可溶性糖的详细步骤,有实践经验的更好,标准曲线用蔗糖还是葡萄糖有区别吗
在作物的碳素营养中,作为营养物质主要是指可溶性糖和淀粉.它们在营养中的作用主要有：合成纤维素组成细胞壁；转化并组成其他有机物如核苷酸、核酸等；分解产物是其他许多有机物合成的原料,如糖在呼吸过程中形成的有机酸,可作为 NH 3 的受体而转化为氨基酸；糖类作为呼吸基质,为作物的各种合成过程和各种生命活动提供了所需的能量.由于碳水化合物具有这些重要的作用,所以是营养中最基本的物质,也是需要量最多的一类.
一、原理
糖在浓硫酸作用下,可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛,生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物,在一定范围内,颜色的深浅与糖的含量成正比,故可用于糖的定量测定.
该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物,不但可以测定戊糖与己糖含量,而且可以测所有寡糖类和多糖类,其中包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应）,所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量,实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量.在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下,用蒽酮法可以一次测出总量,省去许多麻烦,因此,有特殊的应用价值.但在测定水溶性碳水化合物时,则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中,不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差.此外,不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同,果糖显色最深,葡萄糖次之,半乳糖、甘露糖较浅,五碳糖显色更浅,故测定糖的混合物时,常因不同糖类的比例不同造成误差,但测定单一糖类时,则可避免此种误差.
糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为 620 nm ,故在此波长下进行比色.
二、实验材料、试剂与仪器设备
（一）实验材料：
任何植物鲜样或干样.
（二）试剂：
1、80 ％乙醇.
2、葡萄糖标准溶液（ 100 μg/mL ）：准确称取 100 mg 分析纯无水葡萄糖,溶于蒸馏水并定容至 100 mL ,使用时再稀释 10 倍（ 100 μg/mL ）.
3、蒽酮试剂：称取 1.0 g 蒽酮,溶于 80% 浓硫酸（将 98% 浓硫酸稀释,把浓硫酸缓缓加入到蒸馏水中） 1000 mL 中,冷却至室温,贮于具塞棕色瓶内,冰箱保存,可使用 2 ～ 3 周.
（三） 仪器设备：
分光光度计,分析天平,离心管,离心机,恒温水浴,试管,三角瓶,移液管（ 5 、 1 、 0.5 mL ）,剪刀,瓷盘,玻棒,水浴锅,电炉,漏斗,滤纸.
三、实验步骤
1、 样品中可溶性糖的提取
称取剪碎混匀的新鲜样品0.5～1.0 g（或干样粉末5 ～100 mg ）,放入大试管中,加入15 mL 蒸馏水,在沸水浴中煮沸 20 min ,取出冷却,过滤入100 mL容量瓶中,用蒸馏水冲洗残渣数次,定容至刻度.
2、标准曲线制作
取 6 支大试管,从 0 ～ 5 分别编号,按表 24-1 加入各试剂.
表 蒽酮法测可溶性糖制作标准曲线的试剂量
试 剂 管 号
0 1 2 3 4 5
100 μg/mL 葡萄糖溶液（ mL ） 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
蒸馏水（ mL ） 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0
蒽酮试剂（ mL ） 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0
葡萄糖量（ μg ） 0 20 40 60 80 100
将各管快速摇动混匀后,在沸水浴中煮 10 min ,取出冷却,在 620 nm 波长下,用空白调零测定光密度,以光密度为纵坐标,含葡萄糖量（ μg ）为横坐标绘制标准曲线.
3、样品测定
取待测样品提取液 1.0 mL 加蒽酮试剂 5 mL ,同以上操作显色测定光密度.重复 3 次.
四、结果计算
式中： C ——从标准曲线查得葡萄糖量, μg .
V T ——样品提取液总体积 , mL .
V 1 ——显色时取样品液量, mL .
W ——样品重（ g ）.
注意 看原理哦 用蔗糖 葡萄糖都行哦