在引物设计时,长度超过25bp时,其PCR退火温度怎么确定?

在引物设计时,长度超过25bp时,其PCR退火温度怎么确定? pcr 一段2000多bp的基因 引物设计时 条件怎么设 包括引物长度 gc含量等 因为我用软件设计时总是设不出来 可以改哪些参数呢 引物设计时如何添加酶切位点 引物设计时如何添加酶切位点 引物长度mer和bp的区别 pcr引物设计时引物位置的选择引物的位置 PCR扩增时RNA引物序列设计时,引物序列是与目标基因前的序列互补呢,还是与目标基因互补?就是说引物序列与目标基因是否有交叉?如果引物是和其始、终止序列互补设计，而不是与目标基因的 请问PRIMER 设计时的RATING 如果我们用PRIMER 5.0对一对引物中评价其好坏我们进行PCR扩增时,有的时候会出现多条带.会不会是引物自身以及引物间互作引起的,而不仅是由于引物特异性不强引起呀? 为什么PCR引物可以决定被合成片段的大小PCR引物设计时一般要求引物的长度和GC比各是多少？这种要求的基本理论依据是什么 【求助/交流】如何在引物设计时增加限制性酶切位点 如何查引物bp 试举两个进行PCR引物设计的生物信息学程序,并选用其中的任何一个对GenBank登录号为MMU41636 的序列设计一对PCR引物,要求产物长度为1000-1500bp,引物Tm值范围为40℃-60℃,引物GC%为40%-60%,请写出具体 引物3 端前几个碱基不配对还能扩出产物吗?我是说在PCR时,引物出现错配到300bp,但它的3端前3个碱基没和300bp处配上.引物也可以在300bp处扩吧?只是扩时是从引物的第4个也就是和模板开始配对的 引物设计时为什么要设计两个?他们两个是什么关系 PCR引物设计问题如果我设计的引物,扩增出来的目的片段长度为200BP,但是石蜡包埋组织提取出来的DNA模板大多数在100-120BP长度,那该如何.模板比理论上要扩出来的目的片段长度还短,怎么解决 带酶切位点的引物设计问题带酶切位点的引物设计时计算Tm值,退火温度及GC含量时是否要把酶切位点和保护碱基计算在内?我觉得不用,因为酶切位点可以不用跟模板结合, 在Rt△ABC中,∠C=90° p是AB上一个动点,PQ⊥PC交线段CB的延长线于点Q当∠A=30°时，AB=4，设BP=x BQ=Y，求Y关于X的函数解析式，并写出其定义域 零件设计时,为什么在图子上常标其硬度值来表示机械性能要求.