如何确定pcr反应中的退火温度和延长时间

来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2024/11/21 21:26:48
如何确定pcr反应中的退火温度和延长时间如何确定pcr反应中的退火温度和延长时间如何确定pcr反应中的退火温度和延长时间退火温度一般是比你设计引物时的tm值低5度.不过这是要摸索的,用温度梯度PCR.

如何确定pcr反应中的退火温度和延长时间
如何确定pcr反应中的退火温度和延长时间

如何确定pcr反应中的退火温度和延长时间
退火温度一般是比你设计引物时的tm值低5度.不过这是要摸索的,用温度梯度PCR.(顺便说一下,如果你不想花时间摸索温度,建议就用60度.这个温度是我原来做实验时的万能温度.尤其对较短片段PCR适用)
延长时间是看PCR产物长度,一般认为常规taq酶一分钟扩增1kb.比如你的PCR产物是500bp,你就用30秒.不过我一般会在这个基础上再加5秒左右.