用T4连接酶做载体连接为什么一直连不上

用T4连接酶做载体连接为什么一直连不上 为什么构建克隆载体不需T4连接酶为什么PCR扩增出的DNA片段和克隆载体pMD 18-T连接不需T4连接酶,而和表达载体连接就需要T4连接酶. 那为什么连接表达载体时没将T4连接酶混进那个载体附带的Mix液中呢?为什么买的克隆载体附带的mix里有T4连接酶,而表达载体里没有T4连接酶而要额外买?一管酶，三管buffer? T4连接酶可以连接平末端,一样可以连接粘性末端,好像比DNA连接酶厉害的感觉,为什么通常都用DNA连接酶? T4连接酶在室温能连接吗 为什么T4噬菌体会有DNA连接酶?基因工程中会用从T4 噬菌体中分离的DNA连接酶来连接黏性末端,为什么T4噬菌体会有DNA连接酶的?它不是病毒吗? t4噬菌体为什么能提取出t4 dna连接酶? T4噬菌体DNA连接酶连接DNA的特点 t4连接酶连接后产物怎么处理?直接转化吗?哪有参考的资料 用同种限制酶切质粒和含有目的基因的DNA,用DNA连接酶连接后为什么不会出现载体-目的基因连接物这种产物?额。。问错了。。再问一遍，就是他会产生三种连接产物，那其中的那种载体-载体 T4 连接酶的活性如果希望在4°条件下连接DNA片段,请注意,必须是4°,而且之后也不能加热.那么至少需要反应多久啊.因为T4连接酶在4°时活性是相当低的!要做一个温度相关性的定量实验请问该 平末端连接问题最近在做载体构建,有一个5k左右的片段要连接到一个12k左右的载体骨架上,两端都是平末端,始终连不上,不知道连接体系需要怎样的优化,连接酶要多,但是一个10ul的体系中,到底 现在的T4中带有一个叫PEG4000的东西.我做载体连接的时候用加么?加多少啊,别人都没加啊~ 单酶切和双酶切的定义分别是什么?它们有什么不同?做实验的时候要把400bp目的片断连到pcDNA3.1(+)质粒中去：单酶切质粒后用T4 DNA连接酶连接,转化到感受态细菌去,涂板有细菌生长,用目的基因 DNA连接酶把目的基因与载体的黏性末端的碱基对连接起来, 真核重组质粒构建需要pMD18T载体么?我现在构建真核重组质粒,是合成引物,pcr出目的片段,目的片段的双酶切胶回收、pEGFP-C1质粒的双酶切胶回收,T4连接酶连接,转化,送去测序.想问下这步骤对么? E.coliDNA连接酶和T4连接酶的区别 E.coli连接酶与T4连接酶的区别