BrdU检测细胞增殖的方法请教BrdU检测细胞增殖的详细protocal,需要自己亲自做过这个实验的朋友帮忙,不要网上下载的步骤,先谢谢能提供帮助的朋友了!
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/11/22 06:52:24
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BrdU检测细胞增殖的方法
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细胞增殖的检验方法：BrdU标记法
1、细胞以1.5×105 /ml细胞数接种于直径35ml培养皿中（内放置一盖玻片）,培养1天,用含0.4％FCS培养液同步化3天,使绝大多数细胞处于G0 期.
2、终止细胞培养前,加入BrdU（终浓度为30μg/L）,37℃,孵育40min.
3、弃培养液,玻片用PBS洗涤3次.
4、甲醇/醋酸固定10min.
5、经固定的玻片空气干燥,0.3％H2 O2 -甲醇30min灭活内源性氧化酶.
6、5％正常兔血清封闭.
7、甲酰胺100℃,5min变性核酸.
8、冰浴冷却后PBS洗涤,加1抗即抗小鼠BrdU单抗（工作浓度1：50）,阴性对照加PBS或血清.
9、按ABC法进行检测,苏木素或伊红衬染,在显微镜下随机计数10个高倍视野中细胞总数及BrdU阳性细胞数,计算标记指数（LI）.
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BrdU能代替胸腺嘧啶脱氧核苷掺入到新合成的DNA链中.若用姬姆萨染料染色,在染色单体中,DNA只有一条单链掺有BrdU则着色深；DNA的两条单链都掺有BrdU则着色浅.将植物根尖分生组织放在含有BrdU
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