半定量RT-PCR电泳图如何分析

来源：学生作业帮助网编辑：六六作业网时间：2024/11/27 07:13:48

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半定量RT-PCR电泳图如何分析
半定量RT-PCR参照的做法一般有两种：
1) 将要比较的两个样品的BETA-ACTIN 调成一样的亮度,然后就可以直接比较目的基因的亮度了.方法的结果比较直观,但较费事.
2) 不进行调平,一个样品里将目的基因和BETA-ACTIN直接比较,用软件就可以做到,然后将不同样品的这个比值进行比较就可以了.方法比较简单,但结果不够直观.
1.每个标本都要做自己的内参,不能用同一个内参!
2.每个标本在实际做前都要摸最佳循环数,包括内参,但内参的循环数不一定要和目的基因一样,都要选择上升期的中间数作为最佳循环数,否则进入平台期就没有可比性了!所以内参要有它自己的最佳循环数!
3.电泳扫描后,计算灰度值,先用同一标本的内参和目的进行比较,然后用这个相对值再去和其他你所要比较的平行组进行比较,一般每组4个样本以上.这样就可以知道各组之间的差别了!

要求内参的亮度一致，才能比较基因表达差异

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