如何利用RG3000和MX3000P两款荧光定量pcr仪进行相对定量数据分析
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/11/28 22:24:28
如何利用RG3000和MX3000P两款荧光定量pcr仪进行相对定量数据分析
如何利用RG3000和MX3000P两款荧光定量pcr仪进行相对定量数据分析
如何利用RG3000和MX3000P两款荧光定量pcr仪进行相对定量数据分析
（1）分页：将不同的引物（基因）分在不同的页；（2）将来自相同模板的名字一样,可以定义为1234...；例如：P1（引物）P2P3P4WT：calibratorActin(1)A(1)B(1)C(1)MT1：unknown1Actin(2)A(2)B(2)C(2)MT2：unknown2Actin(3)A(3)B(3)C(3) 说明：（1）P1：引物1,扩增相同的基因；（2）WT：calibrator 对照组样本,例如：野生型WT（Wild type）；（3）MT：unknown 未知组样本或处理组样本或待测组样本,例如突变型MT（Mutant type）.数据分析时,选用Quantation 直接出原始图；选用2-△△Ct方法,然后根据提示选择：Analysis - Others - Delta Delta CT Relative Quatatition - validation performed、Gene Interest Quantitation 、Normalizer Quantitation 和Calibrator Defined 出相对定量柱状图；选择2 Standard Curves Relative Quantitation ,然后根据提示选择：Gene Interest StandardCurve、Normalizer Stard Curve和Calibrator Defined 出相对定量柱状图.2、MX3000P荧光定量PCR仪：软件：MxPro根据样本来源和待扩增基因分类如下：Assoc.symbolSample：样本来源NormalizerGene of InterestGene of InterestAWT（Calibrator对照组）ActinGene1Gene2BMT1 (unknown1待测组)ActinGene1Gene2CMT2 (unknown2待测组)ActinGene1Gene2DMT3 (unknown3待测组)ActinGene1Gene2EMT4 (unknown4待测组)ActinGene1Gene2操作步骤：进入软件主页 --- 选择“comparative quantitation” --- well type 选择（Calibrator：如WT；Unknown：如MT）--- 选择：sybr / reference：rox --- 选择Normalizeing assay（看家/内参基因组） --- 然后将选择Assoc.symbol将相同样本来源的样品孔绑定起来；扩增程序设计；结果分析：选定Calibrator 和 Unknown组的内参基因和感兴趣基因,结果分析即可得到柱状图.