转化后菌液pcr有目的条带,然后提质粒和双酶切验证.但是没有得到目的条带.1.提质粒最后一步用的是elution buffer而不是水，这样有什么影响，如果有影响，现在如何补救？2.28a空质粒的位置应

转化后菌液pcr有目的条带,然后提质粒和双酶切验证.但是没有得到目的条带.1.提质粒最后一步用的是elution buffer而不是水，这样有什么影响，如果有影响，现在如何补救？2.28a空质粒的位置应 最近做了连接转化,挑平板上的菌落摇菌后提质粒,单酶切可以切开,而且质粒的大小明显小于空质粒然后用质粒稀释100倍后进行PCR,可以看到目的条带,但是有拖带.然后我继续将质粒稀释至500倍, 单克隆验证,菌液PCR有目的条带的位置,但是质粒PCR后,却没有批出我的目的条带这是为什么呀 在含卡那的培养板和培养基中都长,菌液PCR也有,就是提不出来质粒用pET30a构建原核表达载体,连接产物转化,长了满板,条单克隆到含卡那的液体培养基中,长了,菌液PCR有条带,但提质粒提不出来 请问谁有PCR扩增目的条带 连接 转化的具体步骤呀 菌液PCR有条带,但提不出质粒,为什么? 转基因得到了转化苗,做PCR的时候,如果质粒P出了阳性 对照的基因组没有条带 是不是就能确定没转进去基因第一次做的时候,质粒是阳性的,样品有2个在目的片段那也出现了条带,但很暗,后来再 用菌斑跑PCR有目的条带,用菌液怎么就跑不出?我用农杆菌菌斑稀释后跑PCR,电泳有目的条带,提质粒也有,为什么用菌液就跑不出呢?与目的基因连在同一载体上的筛选基因用菌液跑却每次都能跑 重组质粒酶切后琼脂糖凝胶电泳未出现相应条带的原因有重组质粒的条带,但是没有酶切后的细菌质粒条带和目的基因条带.这样的情况原因是什么? 为什么我的目的基因连接克隆载体转化、提质粒后,酶切鉴定正确,而质粒PCR和菌液PCR鉴定都不正确呢?着急加点 kml?但是我转化后菌落长的还可以啊.酶切目的带在1000左右,质粒PCR在750左右了 32a质粒转化BL21,涂氨苄抗性板有菌落,检测不出目的条带,请问如何解决这个问题? 问个很菜的问题：在跑完pcr以后目的基因已经扩增了很多了,然后再切胶纯化后应该就可以用来去测序了,为什么还要进行后面的连接转化重组质粒的抽提和酶切鉴定啊,他们有什么意义? 用pet32a构建表达载体,目的片段是220bp左右,酶切是ecor1和hindlll,但酶切连接转菌提质粒后却只有2000bp做过pcr验证有目的条带,想不明白是为什么.2个月了,求救 挑克隆鉴定时PCR有目的条带但是酶切没有做分子克隆时,铺板长出很多菌落,于是挑克隆鉴定.PCR扩增目的基因有目的条带,但是酶切重组质粒又只有一条带,酶切时间已经延长至过夜了.挑了好多 PCR没P出条带 很迷茫提了总RNA之后 然后做了反转录 接着用cDNA p一基因 跑胶时 质粒有但没有p的基因 为什么 做了好几次 PCR产物为什么会出现100~200bp的条带我用菌落PCR检测library质粒扩增质量,引物用的是takara的M13正反引物,目的质粒基因长度为~500bp.PCR完后电泳图谱显示~750bp有较明显条带,很奇怪的就是100~200bp有 PCR有扩出来条带,但目的条带不是太亮就有什么原因 质粒双酶切质粒大小正确,菌落PCR,也有条带,但是双酶切就是不成功,有什么建议吗?