脾细胞和骨髓瘤细胞融合后,如何筛选杂交瘤细胞?其原理是什么?
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/11/06 03:45:45
脾细胞和骨髓瘤细胞融合后,如何筛选杂交瘤细胞?其原理是什么?
脾细胞和骨髓瘤细胞融合后,如何筛选杂交瘤细胞?其原理是什么?
脾细胞和骨髓瘤细胞融合后,如何筛选杂交瘤细胞?其原理是什么?
细胞融合是一个随机的物理过程.在小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞混合细胞悬中,经融合后细胞将以多种形式出现.如融合的脾细胞和瘤细胞、融合的脾细胞和脾细胞、融合的瘤细胞和瘤细胞、未融合的脾细胞、未融合的瘤细胞以及细胞的多聚体形式等.正常的脾细胞在培养基中存活仅5～7天,无需特别筛选,细胞的多聚体形式也容易死去.而未融合的瘤细胞则需进行特别的筛选去除.细胞DNA合成一般有两条途径.主途径是由糖和氨基酸合成核苷酸,进而合成DNA,叶酸作为重要的辅酶参与这一合成过程.另一辅助途径是在次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷存在的情况下,经次黄嘌呤磷酸核糖转化酶（HGPRT）和胸腺嘧啶核苷激酶（TK）的催化作用合成DNA.细胞融合的选择培养基中有三种关键成分：次黄嘌呤（hypoxanthine,H）、氨甲蝶呤（aminopterin,A）和胸腺嘧啶核苷（thymidine,T）,所以取三者的字头称为HAT培养基.氨甲蝶呤是叶酸的拮抗剂,可阻断瘤细胞利用正常途径合成DNA,而融合所用的瘤细胞是经毒性培养基选出的HGPRT－细胞株,所以不能在该培养基中生长.只有融合细胞具有亲代双方的遗传性能,可在HAT培养基中长期存活与繁殖.有限稀释与抗原特异性选择：由于细胞融合是一个随机的过程,在已经融合的细胞中,有相当比例的无关细胞的融合体,需细筛选去除.筛选过程一般分为两步进行：一是融合细胞的抗体筛选,二是在此基础上进行的特异性抗体筛选.将融合的细胞进行充分稀释,使分配到培养板的每一孔中的细胞数在0至数个细胞之间（30％的孔为0才能保证每个孔中是单个细胞）,培养后取上清以ELISA法选出抗体高分泌性的细胞；这一过程常被习惯地称作克隆化.将这些阳性细胞再进行克隆化,应用特异性抗原包被的ELISA找出针对目标抗原的抗体阳性细胞株,增殖后进行冻存、体外培养或动物腹腔接种.
放在选择性培养基上培养..杂交到的细胞有 3种 脾细胞和脾细胞， 脾细胞和瘤细胞， 瘤细胞和瘤细胞。3种 ..放在选择性培养基上连续培养. 比如说有什么脾细胞可以分泌出抗体那种抗原的物质...而其他细胞不能够抵抗..脾细胞和脾细胞 一般不会培养到50代..就会死了..放在选择性培养基上的瘤细胞和瘤细胞 没有相应的抗体 所以自动被消灭掉..脾细胞和瘤细胞..因为具有无限繁殖和有抗体产生 所以能够存活...
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放在选择性培养基上培养..杂交到的细胞有 3种 脾细胞和脾细胞， 脾细胞和瘤细胞， 瘤细胞和瘤细胞。3种 ..放在选择性培养基上连续培养. 比如说有什么脾细胞可以分泌出抗体那种抗原的物质...而其他细胞不能够抵抗..脾细胞和脾细胞 一般不会培养到50代..就会死了..放在选择性培养基上的瘤细胞和瘤细胞 没有相应的抗体 所以自动被消灭掉..脾细胞和瘤细胞..因为具有无限繁殖和有抗体产生 所以能够存活.存活下来的 就是合格的杂交瘤细胞.. 一般筛选2次...
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