菌液PCR可靠吗
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/12/24 04:17:14
菌液PCR可靠吗
菌液PCR可靠吗
菌液PCR可靠吗
不知道您做菌液PCR的目的是什么.
如果是鉴定构建好的克隆或者亚克隆,那么菌液PCR就完全没有问题.PCR体系也可以小一些,只要注意,菌液的量一定不能过多,一般10ul的PCR体系中,加入过夜培养的菌液0.5ul就可以了.或者不用那么麻烦,当菌在培养板上生长出来的时候,用灭菌牙签或者枪头沾一下,再沾到PCR体系中,然后扔掉枪头或者牙签就可以了.PCR程序设置按一般的就可以,循环数不用多,一般如果是构建成功的,15个循环就完全可以看出目的条带了.想要菌液PCR可靠,另一个要注意的点就是做的时候要设好阳性与阴性对照,特别是阴性对照.
如果是想直接从基因组里面获得某个基因或者片段,建议您还是用纯的DNA模板比较好.
如果您这方面有困难的话,可以寻求专业的生物技术公司的帮助,我们百替生物就可以DNA提纯,以及载体构建等服务,可以来看看哦.
我一般只有检测的时候（Taq酶菌落PCR）使用菌液或者牙签挑菌作模板，第一步预加热的时候时间长一点（5min）。
如果是做亚克隆操作，那么还是用比较纯的模板好，用的PCR酶反应体系本身也是比较严格的高保真PCR体系，比如PrimerSTAR、Fusion，你想想看这些高保真的酶一次实验就要花掉20~40块钱，用菌液作模板是不是有点太不般配了……...
全部展开
我一般只有检测的时候（Taq酶菌落PCR）使用菌液或者牙签挑菌作模板，第一步预加热的时候时间长一点（5min）。
如果是做亚克隆操作，那么还是用比较纯的模板好，用的PCR酶反应体系本身也是比较严格的高保真PCR体系，比如PrimerSTAR、Fusion，你想想看这些高保真的酶一次实验就要花掉20~40块钱，用菌液作模板是不是有点太不般配了……
收起
赞ID~ 一般能P出来都是没问题的 除非你引物不好 之前P出别的差不多大小的条带被你连进去了 反正P完还得测序的