通过16srDNA鉴定细菌的疑惑1、为什么不能把PCR所得溶液直接用来测序,是测序技术的限制么?提供给测序公司的应该是转化阳性的菌液,还是提取出来的质粒?2、pcr产物跑胶后要胶回收再做载体连
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/11/06 07:40:42
通过16srDNA鉴定细菌的疑惑1、为什么不能把PCR所得溶液直接用来测序,是测序技术的限制么?提供给测序公司的应该是转化阳性的菌液,还是提取出来的质粒?2、pcr产物跑胶后要胶回收再做载体连
通过16srDNA鉴定细菌的疑惑
1、为什么不能把PCR所得溶液直接用来测序,是测序技术的限制么?提供给测序公司的应该是转化阳性的菌液,还是提取出来的质粒?
2、pcr产物跑胶后要胶回收再做载体连接,能否用pcr后溶液回收?
3、其操作流程是这样么?DNA提取---16srdna片段pcr扩增---跑胶检测---
胶回收---T载体连接---质粒转化---阳性克隆菌筛选（白色菌落）--提取质粒?--送去测序
通过16srDNA鉴定细菌的疑惑1、为什么不能把PCR所得溶液直接用来测序,是测序技术的限制么?提供给测序公司的应该是转化阳性的菌液,还是提取出来的质粒?2、pcr产物跑胶后要胶回收再做载体连
1. PCR所得溶液必须经过纯化后才能进行测序.因为PCR反应中的残留物很多,都会影响测序的结果,可以说是测序技术的限制.目前PCR完后用酒精醋酸钠进行纯化,再上机检测.菌液和质粒都可以进行测序.
2.PCR产物跑胶的目的是找到目的条带,因为在你PCR的过程中也许会产生一些非特异性的扩增,这些是不能拿去做转化的.所以跑玩PCR后要跑胶,找到目的片段再进行切胶回收.溶液回收是不行的.
3.基本流程就是这样的.DNA提取完了以后还是要跑胶检测的,测定DNA提取的效果和浓度.胶回收一定是找到目的片段的胶才能切胶回收,非目的片段的是没有用的.扩增不需要用高保真酶,TAQ酶会在产物末端直接加上A碱基,能直接和T载体连接,方便的很.
1 直接PCR溶液中含有酶、缓冲体系会干扰测序的进行，因此不能直接测序。现在提供给测序公司的可以是菌液也可以是质粒，二者价格略有不同。
2 基本不行。因为可能会有少量非特异性条带存在。但是如果你采用的是高特异性PCR，则产物可直接进行连接。
3 实际上，你扩增应该用高保真酶，如Pfu、KOD等。扩增结束后用Taq加上A末端。然后割胶回收，连接载体。...
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1 直接PCR溶液中含有酶、缓冲体系会干扰测序的进行，因此不能直接测序。现在提供给测序公司的可以是菌液也可以是质粒，二者价格略有不同。
2 基本不行。因为可能会有少量非特异性条带存在。但是如果你采用的是高特异性PCR，则产物可直接进行连接。
3 实际上，你扩增应该用高保真酶，如Pfu、KOD等。扩增结束后用Taq加上A末端。然后割胶回收，连接载体。
收起
1.质粒
2.否
3.是