转入大肠杆菌质粒还可以提取转入农杆菌?为什么?

来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2024/12/23 10:39:54
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转入大肠杆菌质粒还可以提取转入农杆菌?为什么?

转入大肠杆菌质粒还可以提取转入农杆菌?为什么?
首先,你的质粒必须是穿梭质粒,否则不可能转的.
如果是穿梭质粒的话,提取出来直接转化感受态的农杆菌就好.
步骤:
农杆菌感受态细胞的制备
1.挑取少许农杆菌,接种于5ml LB液体培养基 (含50mg/L STR)中,28℃、200r/mim培养过夜.
2.取2ml培养物于LB液体培养基 (含50mg/L STR) 中继续培养,直至OD800 为0.5左右.
3.将培养物置冰浴中30min,4℃、5000r/min、离心5min,弃去上清液.
4.用10ml冷的0.1mol/L NaCl悬浮菌液.
5.4℃、5000r/min,离心5min,弃去上清液.
6.用1ml冷的CaCl2 (20mmol/L)悬浮,分装成50μl/管,液氮中冷冻后至-80℃保存
不是穿梭载体.

都是细菌,为什么不能。质粒又不那么认菌的

都是的啊

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