基因克隆实验克隆实验问题 1、以cDNA为模板做PCR反应,得到的产物和预期的长度一样.2、再用pMD-19载体连接目的片段,之后液体LB（含氨苄）200转震荡培养1-2小时,取300微升倒在LB平板培养24小时

来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/11/18 09:30:03
基因克隆实验克隆实验问题1、以cDNA为模板做PCR反应,得到的产物和预期的长度一样.2、再用pMD-19载体连接目的片段,之后液体LB（含氨苄）200转震荡培养1-2小时,取300微升倒在LB平板培

基因克隆实验克隆实验问题 1、以cDNA为模板做PCR反应,得到的产物和预期的长度一样.2、再用pMD-19载体连接目的片段,之后液体LB（含氨苄）200转震荡培养1-2小时,取300微升倒在LB平板培养24小时
基因克隆实验
克隆实验问题
1、以cDNA为模板做PCR反应,得到的产物和预期的长度一样.
2、再用pMD-19载体连接目的片段,之后液体LB（含氨苄）200转震荡培养1-2小时,取300微升倒在LB平板培养24小时左右,以菌落长到直径1-2毫米为止；再挑3-5个单克隆放大培养24小时左右.
3、裂解菌体后,4°C ,12 000 g ,离心20-30分钟,取上清液.
4、PCR检测所得裂解后上清液（引物为M13-47,RV-M）,得到了目的片段大小的产物（稍长些）.
5、送菌液上清液测序（使用通用引物M13-47）,但是测序结果却是如下其概况：在载体插入点之间的序列BLAST后,显示为杆菌等细菌的片段,共送了16个样品均是如此（本实验应该是动物的序列）,看来不是空载,难道是载体连接上了细菌的一段序列,为什么会插入细菌片段呢,而且长度就这么巧!还是其他什么原因呢,恳请赐教!

基因克隆实验克隆实验问题 1、以cDNA为模板做PCR反应,得到的产物和预期的长度一样.2、再用pMD-19载体连接目的片段,之后液体LB（含氨苄）200转震荡培养1-2小时,取300微升倒在LB平板培养24小时
目的基因是动物的相关基因片段PCR扩增的吗?你采用mRNA还是DNA啊?是扩增16SrDNA?不然怎么会显示杆菌的片段?BLAST比对如此奇怪?应该不会插入错误16组,估计实验操作的问题,或者使用NCBI比对生物信息时有误.说的够概况的,不太清楚,也很好奇,能不能步骤表述详细点?
一个好办法,克隆的菌落可以甘油保藏后直接送去测序,但是要告诉测序公司是甘油管样品.这样就可以看看是不是你前面的步骤有误或污染了.

你在做细菌培养的时候肯定是受到污染了。
不明白为什么是送菌液的上清液测序？应该是送检含有培养基的细菌培养物啊。。。。
你需要仔细检查你的实验过程有没有被污染的环节。例如挑选的单克隆是否是阳性？ 是否选了假阳性的？
第四步没有必要裂解菌体取上清做菌检。直接检测就可以啊...

全部展开

你在做细菌培养的时候肯定是受到污染了。
不明白为什么是送菌液的上清液测序？应该是送检含有培养基的细菌培养物啊。。。。
你需要仔细检查你的实验过程有没有被污染的环节。例如挑选的单克隆是否是阳性？ 是否选了假阳性的？
第四步没有必要裂解菌体取上清做菌检。直接检测就可以啊

收起

用同种限制酶切割片段当然会插入细菌基因片段了

基因克隆实验克隆实验问题 1、以cDNA为模板做PCR反应,得到的产物和预期的长度一样.2、再用pMD-19载体连接目的片段,之后液体LB（含氨苄）200转震荡培养1-2小时,取300微升倒在LB平板培养24小时 设计克隆一个基因的CDNA序列的实验!注意是实验哦!周四之前!谢谢,满意再+50! 设计一个基因克隆的实验方案 全长基因克隆和cDNA全程克隆之后,下一步都是什么?我现在有很多的困惑,我克隆了一个基因的全长,然后又克隆了它的cDNA的全长,我想知道,两种克隆下来可以继续做什么实验,能得到什么样的结 绿色荧光蛋白的基因克隆实验怎么做? 求基因克隆的完整实验方案,谢谢啊 设计一个实验进行特定基因的克隆测序 CDNA如何克隆 奇妙的克隆 某些小问题,就2个.1、什么叫做“克隆”?“克隆”又被称为什么?2、“克隆鲫鱼出世前后”一节的说明顺序是什么?为什么不以时间顺序来写“克隆实验”呢?文中这样安排有什么好 目的基因序列已知,如何克隆其cDNA? 我想做胰岛素导入大肠杆菌的基因克隆实验.在ncbi中查找到了cdna,准备跑pcr,这个时候需要提取出cdna模需要从人体中提取cdna模版吗?还是去基因公司合成基因片段比较好?pcr可以只提供基因序列, 设计实验克隆基因查询基因序列数据库,检索获得烟草肌动蛋白基因的完整序列.请设计实验方案从烟草中克隆该基因. 您好,我还有个问题,克隆载体表达蛋白量很小,为什么很多实验还是采用,克隆载体与基因片段重组.您好,我还有个问题,克隆载体表达蛋白量很小,为什么很多实验还是采用,克隆载体与基因片段 “克隆鲫鱼出世前后”一节为什么不以时间的先后来写“克隆实验”呢?文中这种安排有什么好处?奇妙的克隆的问题—— 如果利用RACE技术或cDNA文库筛选法或电子克隆等方法克隆了1条可能具有耐盐功能的基因,如何证明所克隆基因的功能? 试设计一个实验,来克隆鉴定调控两近源物种某一差异性状的基因 我即将做克隆基因的实验,请问我现在要准备要些什么呢? 要开始做基因克隆的实验了,请问大概的步骤有哪些啊!