鸡蛋中如何提取卵清白蛋白

来源：学生作业帮助网编辑：六六作业网时间：2025/01/12 06:26:48

鸡蛋中如何提取卵清白蛋白鸡蛋中如何提取卵清白蛋白鸡蛋中如何提取卵清白蛋白一、实验目的与原理鸡卵粘蛋白存在于鸡蛋清中,对胰蛋白酶有强烈的抑制作用,高纯度的鸡卵粘蛋白抑制胰蛋白酶的分子酶的分子比为1:1.

鸡蛋中如何提取卵清白蛋白
鸡蛋中如何提取卵清白蛋白

鸡蛋中如何提取卵清白蛋白
一、实验目的与原理
鸡卵粘蛋白存在于鸡蛋清中,对胰蛋白酶有强烈的抑制作用,高纯度的鸡卵粘蛋白抑制胰蛋白酶的分子酶的分子比为1:1.鸡卵粘蛋白在中性或酸性溶液中对热和高浓度的脲都是相当稳定的,而在碱性溶液中较不稳定.
由于鸡卵粘蛋白对胰蛋白酶有强烈的抑制作用,因此可以用鸡卵粘蛋白做亲和配基配制纯化胰酶的亲和材料.
二、材料与试剂：
1．材料：新鲜鸡蛋2只
2：仪器：抽滤瓶500－1000ml、烧结漏斗、移液器、磁力搅拌器
3：试剂：
10％TCA,用固体NaOH调调PH至1.05－1.10,需要50ml、5N HCL、5N NaOH、冷丙酮、胰蛋白酶液、BAEE-0.05M,PH8.0Tris-HCL缓冲液（每ml含0.34BAEE和2.22mgCaCL2）,50ml
pH8.0,0.1M Tris-HCL缓冲液
三、操作步骤
1,取两只新鲜鸡蛋,得蛋清50ml,置于烧杯中,外用温水浴25℃－30℃,在不断搅拌条件下,缓慢加入等体积得三氯乙酸－丙酮（1:2V/V）,立即出现大量白色絮状沉淀,加完后最终PH约3.5,再继续搅拌30min,然后在4℃冰箱中放置过夜.
2,次日用布氏漏斗抽滤,得黄绿色清液.
3,边搅拌边加入4℃预冷的丙酮200ml沉淀蛋白,在4℃放置2h之后将上清液小心倒入瓶中回收,下部沉淀部分于4000rpm离心5min,收集沉淀.
4,将沉淀溶于10ml无离子水中,对无离子水（50倍）透析4h,换水两次,再对碳酸钠缓冲液透析过夜,4000rpm离心10min ,去除不溶物.

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