我是用cDNA作模板的,退火53°第一次跑出来了,目的在150左右,又粗又亮,然后纯化就纯没了,于是再重复P,每一次P的结果都不一样,目的条带时有时无,杂带也是时有时无,有的时候杂带很多,有的时
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/11/28 15:45:36
我是用cDNA作模板的,退火53°第一次跑出来了,目的在150左右,又粗又亮,然后纯化就纯没了,于是再重复P,每一次P的结果都不一样,目的条带时有时无,杂带也是时有时无,有的时候杂带很多,有的时
我是用cDNA作模板的,退火53°第一次跑出来了,目的在150左右,又粗又亮,然后纯化就纯没了,于是再重复P,每一次P的结果都不一样,目的条带时有时无,杂带也是时有时无,有的时候杂带很多,有的时候P出来什么都没有,请问是什么原因,还有就是,我做的这个,文献中其他物种的退火温度是60,我该怎么办……
我是用cDNA作模板的,退火53°第一次跑出来了,目的在150左右,又粗又亮,然后纯化就纯没了,于是再重复P,每一次P的结果都不一样,目的条带时有时无,杂带也是时有时无,有的时候杂带很多,有的时
镁离子浓度,引物都正确吧,酶呢?带纹和镁离子浓度有很大关系,查看下原来的实验记录哦.
你说的纯化没有了?是没有切对带吧?考虑150是你的Cdna的值吗?有点小吧,一般在300差点吧?
文献说是60度你用53出来的蛮有可能是非特异性结合出来的。一般来说退火温度和模板没什么大关系，除非模板是GC/AT非常rich的。
纯化纯化没了的话只能说明你起始量太低和纯化时各步骤loose太多。
RT之后的cDNA里边的盐浓度有时候对PCR是个问题，考虑到你pipet时候可能pipet的不均一。
这样情况下，你可以纯化以下cDNA的模板，保证每次PCR的时候盐浓度都是一...
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文献说是60度你用53出来的蛮有可能是非特异性结合出来的。一般来说退火温度和模板没什么大关系，除非模板是GC/AT非常rich的。
纯化纯化没了的话只能说明你起始量太低和纯化时各步骤loose太多。
RT之后的cDNA里边的盐浓度有时候对PCR是个问题，考虑到你pipet时候可能pipet的不均一。
这样情况下，你可以纯化以下cDNA的模板，保证每次PCR的时候盐浓度都是一样的。
还有就是做个control吧，比方说gDNA的。PCR时有时无一般是手上的问题。
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纯化过程损失太多了吧