为什么我将一个1.5kb的基因克隆到T载体上,送去测序总是少了一截呢,每次都是少了下游引物的那一截缺失的片段大小还不一样,这个基因我用引物扩下来的时候是正常的.连到T载体,测序就总是
来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2024/11/05 22:07:58
为什么我将一个1.5kb的基因克隆到T载体上,送去测序总是少了一截呢,每次都是少了下游引物的那一截缺失的片段大小还不一样,这个基因我用引物扩下来的时候是正常的.连到T载体,测序就总是为什么我将一个1.
为什么我将一个1.5kb的基因克隆到T载体上,送去测序总是少了一截呢,每次都是少了下游引物的那一截缺失的片段大小还不一样,这个基因我用引物扩下来的时候是正常的.连到T载体,测序就总是
为什么我将一个1.5kb的基因克隆到T载体上,送去测序总是少了一截呢,每次都是少了下游引物的那一截
缺失的片段大小还不一样,这个基因我用引物扩下来的时候是正常的.连到T载体,测序就总是少了一截
为什么我将一个1.5kb的基因克隆到T载体上,送去测序总是少了一截呢,每次都是少了下游引物的那一截缺失的片段大小还不一样,这个基因我用引物扩下来的时候是正常的.连到T载体,测序就总是
请检查以下几点
1.PCR扩增的延伸时间是否足够
2.连接前回收片段是否是目的片段
3.克隆后是否进行菌液PCR鉴定大小符合目的片段
4.测序是否采用双向测序
适当延长一下连接的时间,还有测序前,进行一下菌落PCR检测,看看片段大小我连16度连接了12h以上,菌落pcr一开始认为只要是p出来就可以送测序了,测了一次结果短了。后面就菌落pcr看了看大小,确实片段是小了。就是不明白为什么会小了,找不到为什么短了一截的原因,按理说t载体克隆个1.5k 的片段应该是挺简单的啊,为什么我重复了几次都是在一端短了,而且每次短的都不一样...
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适当延长一下连接的时间,还有测序前,进行一下菌落PCR检测,看看片段大小
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你就测了一个方向的吧,要双向测然后拼接起来就OK了。你的片段比较长,测序一般是测双向在拼接起来就是完整的序列了
为什么我将一个1.5kb的基因克隆到T载体上,送去测序总是少了一截呢,每次都是少了下游引物的那一截缺失的片段大小还不一样,这个基因我用引物扩下来的时候是正常的.连到T载体,测序就总是
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