植物基因组已经提出来了,PCR一直没有p出来,我的引物是根据cDNA设计的,大恩不言谢植物基因组已经提出来了,PCR一直没有p出来,我的引物是根据cDNA设计的,问题可能是因为引物刚好选在两个外显
来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2024/11/24 11:59:23
植物基因组已经提出来了,PCR一直没有p出来,我的引物是根据cDNA设计的,大恩不言谢植物基因组已经提出来了,PCR一直没有p出来,我的引物是根据cDNA设计的,问题可能是因为引物刚好选在两个外显
植物基因组已经提出来了,PCR一直没有p出来,我的引物是根据cDNA设计的,大恩不言谢
植物基因组已经提出来了,PCR一直没有p出来,我的引物是根据cDNA设计的,问题可能是因为引物刚好选在两个外显子之间,想问下是不是这个原因(别笑我问题很幼稚,我只是一个大三的),还有就是每次p时在最前面大概100bp左右都有很亮的片段,我是用超表达和cDNA的两対引物两两配对的,结果4个在最前面都有很亮的条带,也不拖尾,很漂亮,不知道那个是什么,有人说是引物二聚体,我不确定,
植物基因组已经提出来了,PCR一直没有p出来,我的引物是根据cDNA设计的,大恩不言谢植物基因组已经提出来了,PCR一直没有p出来,我的引物是根据cDNA设计的,问题可能是因为引物刚好选在两个外显
我想你可以从三个方面去找原因:
1.基因组的提取是不是真的没有错误.
2.引物的设计是不是正确,如果是选在两个外选子之间,那样会有特异的序列(外显子和内含子连接处序列有特异性)
3 PCR程序有没有优化,如果前面两点都没问题,那么你可以考虑做一下优化.
前面100bp一般都会是引物二聚体,你可以看看你设计的引物之间是不是互补性很强.
PCR不成功的原因非常地多,你试试PCR程序设置一下,退火温度调高些,加大模版的量
你的目的基因片段多长啊?我不知道多长,但是cDNA大概600bp左右那么,那个100bp的肯定是二聚体了。。。你试试把循环数提高5个循环吧,然后退火温度提高一些吧,最好设计一下几个温度一齐PCR,然后假设循环数20cycle,25cycle,30cycle,这样看看行不行。。。如果都不行的话,可能是引物问题了...
全部展开
你的目的基因片段多长啊?
收起
建议做RT-PCR