pcr反应哪一步要循环?还是变性、退火、延伸整个一起循环?

来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2024/12/18 10:20:12
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1、预变性(Initial denaturation)  模板DNA完全变性与PCR酶的完全激活对PCR能否成功至关重要,建议加热时间参考试剂说明书,一般未修饰的Taq酶激活时间为两分钟.
2、循环中的变性步骤  循环中一般95℃,30秒足以使各种靶DNA序列完全变性,可能的情况下可 缩短该步骤时间
  变性时间过长损害酶活性,过短靶序列变性不彻底,易造成扩增失败.
3、引物退火(Primer annealing)  退火温度需要从多方面去决定,一般根据引物的Tm值为参考,根据扩增的长度适当下调作为退火温度.然后在此次实验基础上做出预估.
  退火温度对PCR的特异性有较大影响.
4、引物延伸  引物延伸一般在72℃进行(Taq酶最适温度).但在扩增长度较短且退火温度较高时,本步骤可省略
  延伸时间随扩增片段长短而定,一般推荐在1000bp以上,含Pfu及其衍生物的衍生设定为1min/kbp.
5、循环数  大多数PCR含25-40循环,过多易产生非特异扩增.
6、最后延伸  在最后一个循环后,反应在72℃维持5-15分钟.使引物延伸完全,并使单链产物退火成双链.
其中第2到第4步要循环即变性、退火、延伸都要循环

pcr反应哪一步要循环?还是变性、退火、延伸整个一起循环? PCR反应的循环前和循环后的温度和时间做pcr除了必要的变性,退火,延伸的温度和时间,还需要在循环之前设定一个温度和时间,循环完成之后也要设定个温度和时间,最后还有个保存的时间,我想 PCR在 变性、退火、延伸循环外,为什么还要先进行预变性和总延伸?作用原理及目的分别是什么如题 帮我看看pcr反应条件在文献上看了两个条件:1、预变性94度5分钟,变性94度1分钟,67度退火1分钟,72度延伸1分钟,72度7分钟,30个循环;2、预变性95度2分钟,变性94度30秒,67度退火1分钟,72度延伸45秒,7 PCR变性温度是多少?退火、延伸、复性分别是多少? 如何优化pcr反应中的退火温度 如何优化PCR反应中退火温度 做PCR反应为什么在循环开始前要热变性5min再正式进入第一次的循环 关于PCR的问题?问一个,PCR在变性,退火,延伸的循环前后各有一个单独的94度5分钟,72度5分钟,这两个是做什么用的,如果不加行不行? 46.下列关于PCR的陈述错误的是A.PCR循环包括模板变性、引物复性和核苷酸合成B.PCR要用热稳定的DNA聚合酶C.PCR反应需要4种dNTP参与D.理想的PCR引物要长度和G+C含量都相似答案D.为什么?我 PCR扩增中,降低退火温度、延长变性时间对反应有何影响 退火温度递减的PCR程序叫什么比如PCR退火温度是55 然后每个循环退火温度降低1度 PCR反应退火温度的高低与什么因素有关 如何确定pcr反应中的退火温度和延长时间 如何确定PCR反应中的退火温度和延长时间? 请教梯度PCR设置梯度问题请问:梯度PCR在变性、退火及延伸三步均可设置梯度,那么如果在摸条件时三步均设置梯度,是否有N*M*K(N、M、K分别代表三步的条件数)种组合?如果是,那在仪器里如 在三羧酸循环中,有底物水平的磷酸化的是哪一步反应? PCR程序中的退火温度和循环次数受哪些因素影响