我把我的目的片段连在载体上,菌液送公司测序起始密码子有两个碱基有误,是否很大可能是公司测序的问题?菌液和酶切检测都没有问题!送测序是我自带的加了酶切位点的引物!我的目的片段

我把我的目的片段连在载体上,菌液送公司测序起始密码子有两个碱基有误,是否很大可能是公司测序的问题?菌液和酶切检测都没有问题!送测序是我自带的加了酶切位点的引物!我的目的片段 穿刺菌去测序的原理和步骤是什么?特别想知道,他们是怎么切出我连在载体上的目的片段的. 我的目的片段连载体后,挑单克隆摇菌,用菌液PCR,没有条带. 我的目的片段连T载体后,挑单克隆摇菌,用菌液PCR能P出目的片段,再提质粒用Ecor1做酶切,片段变小怎么回 在我做的载体与片段连接中,在转化后,酶切后质粒是不长的,而重组后的长了,可是,最后结果却是.结果是,片段根本没有连进去,连进去的却是一个远远大于我的目的片段的碱基序列,这是为什么 关于 克隆的问题.假如我有有一个基因片段,未知序列.我可以把它连接到T载体,然后PCRPCR 用T载体PRIMER,然后测序,然后酶切出片段---------》从而达到得到很多此片段的目的.这个做法行么?或者别 目的片段转入表达载体后我用什么方法可以检测我的目的质粒? 目的片段连接表达载体后酶切出非特异带为什么我的载体11KB,连接了目的片段.PCR能扩出目的带,双酶切出现了三条带,一条载体,一条目的条带,一条非特异带3KB左右.载体上这两个酶只有一个酶 如果我把目的基因连接到质粒载体上,这个载体质粒又有多个启动子,我怎么知道它用那个启动的呢 PCR扩增出目的片段之后为什么要酶切?酶切下来的是目的片段和载体?然后再把它们连起来?很困惑. 我的片段大概有96个氨基酸,蛋白大概多大呢?连到载体Pet-28a上面,目的片段没有终止密码子,只是上游加了ATG. 转化pET32a一个菌落也不长是什么原因啊我在做分子克隆,克隆了四个片段,要在pET32a载体上表达,可是酶切,连接,转化大肠杆菌BL21以后一个菌落也不长,我已经试过各种载体和目的片段的比例,而 酶切不出来,是怎么回事?转化涂板挑菌后,摇菌6-8h后,我用先前目的片段的引物,做了个菌液PCR,电泳后表明目的片段从菌液中扩出来了,这个应该说明目的片段连接到载体中了的,但我提出质粒后, 目的基因未连接到克隆载体上这是为什么?我用的克隆载体是PMD-18! 如何使目的基因连接到质粒载体上,目的基因怎么获得呢?如果我要一种细胞因子的基因,怎样才能得到呢?应该选择什么样的质粒载体呢? 目的基因片段与载体DNA连接的主要有? 如何画出连有目的片段的载体结构图?想做个示意图,就是一个载体结构图和一个目的片段图（ORF）,两个图拉一个二合一的箭头,下面一个连接后的载体结构图,并标明了目的片段具体的位置的 连接到T载体上面后,做双酶切,条带不正确,目的片段变大是什么原因