在我做的载体与片段连接中,在转化后,酶切后质粒是不长的,而重组后的长了,可是,最后结果却是.结果是,片段根本没有连进去,连进去的却是一个远远大于我的目的片段的碱基序列,这是为什么

在我做的载体与片段连接中,在转化后,酶切后质粒是不长的,而重组后的长了,可是,最后结果却是.结果是,片段根本没有连进去,连进去的却是一个远远大于我的目的片段的碱基序列,这是为什么 转化pET32a一个菌落也不长是什么原因啊我在做分子克隆,克隆了四个片段,要在pET32a载体上表达,可是酶切,连接,转化大肠杆菌BL21以后一个菌落也不长,我已经试过各种载体和目的片段的比例,而 T载体连接问题现在在做5,RACE.扩增出目的条带后胶回收,然后用特异性引物去嵌套验证,结果也有目的大小的条带扩增出来,这应该可以说明胶回收的目的片段是正确的.但是用T载体连接后转化到 我在构建质粒：载体大小为9kb,目的片段为3.4kb,连接产物可以用普通的热击方法转化感受态Ecoli.DH5a吗? 转化子为什么在LB液体培养基上培养不出来用PBI121与我的目的片断酶切连接构建植物表达载体,连接后使用DH5α做的感受态转化,长出转化子,但是挑单克隆到具相应抗性的LB液体培养基上培养却 如果将PCR扩增的X基因片段与克隆载体连接,并转化入宿主大肠杆菌中,写出技术路线（包括基因和载体的连接、转化和鉴定）和关键点. 最近在做转化实验,转化到大肠杆菌里面,请问一下什么是假阳性啊是不是指载体没有与目的基因连接,就直接进行转化,如果是这样,在进行“蓝白斑”筛选时,原理是当外源片段插入到载体质粒 转化到大肠杆菌中的质粒会甲基化吗?看到文献说大肠杆菌中的质粒会甲基化,那么用T载体与目的片段连接后转化到大肠杆菌中,会被甲基化吗?急, 酶切不出来,是怎么回事?转化涂板挑菌后,摇菌6-8h后,我用先前目的片段的引物,做了个菌液PCR,电泳后表明目的片段从菌液中扩出来了,这个应该说明目的片段连接到载体中了的,但我提出质粒后, 目的基因片段与载体DNA连接的主要有? 转基因为什么不能直接用PCR产物连接在表达载体上?我在做小麦转基因到拟南芥中,今天在想为什么不能把目标基因PCR后直接表达载体构建,而要用克隆载体后再构建表达载体? 载体与插入片段连接好后 进入宿主细胞转化 这个时候已经有了一次转化 为什么到后面又要转化呢?将载体与插入片段连接上之后,进入到宿主细胞转化：A：200ul感受态细胞加入连接产物后 轻 请问将载体与插入片段连接好后 进入宿主细胞转化 这个时候已经有个一次转化 为什么到后面又要用质粒转...请问将载体与插入片段连接好后 进入宿主细胞转化 这个时候已经有个一次转化 我的片段转入ppicza载体后转化到DH5a里,菌落PCR验证成功,为何就是提不出质粒? 平末端连接问题最近在做载体构建,有一个5k左右的片段要连接到一个12k左右的载体骨架上,两端都是平末端,始终连不上,不知道连接体系需要怎样的优化,连接酶要多,但是一个10ul的体系中,到底 转化后PCR无条带把连接产物连接到T载体之后转化大肠杆菌,用连接产物片段上有而T载体上没有的Kana抗性进行筛选,有转化子长出.培养转化子后PCR,却扩增不出目的条带（即之前的连接产物,约3k 下列与基因工程载体有关的叙述正确的是A.质粒是最常用的载体,在细菌中以独立于拟核之外的方式存在 B．质粒作为载体的原因之一是它为环状,便于切割后与目的基因连接 C．载体中的标记 表达载体的构建中目的片段与表达载体的连接最好是几个小时?时间长一点有什么影响么?