我想问问我加的酶切位点和保护碱基对不对AIF-ECOR1：cg gaattc gctacaagcacgctctaacatct AIF-BAMH1: c ggatcc cggactctgtctcactctctgat 保护碱基和酶切位点我用空格分开了,好辨认!扩出来后准备双酶切后连接质

来源：学生作业帮助网编辑：六六作业网时间：2024/12/24 20:44:42

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我想问问我加的酶切位点和保护碱基对不对
AIF-ECOR1：cg gaattc gctacaagcacgctctaacatct
AIF-BAMH1: c ggatcc cggactctgtctcactctctgat
保护碱基和酶切位点我用空格分开了,好辨认!
扩出来后准备双酶切后连接质粒PCDNA3.1
但是今天试了退火温度60.55都不行

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EcoR I的识别序列和切割序列都没有问题,保护碱基也行.但是BamH I的保护碱基太少,这样PCR产物的2小时酶切效率只有10%,20小时酶切效率只有25%,最好能够设计“CG”为保护碱基,这样能够保证2小时及20小时酶切效率在90%以上.另外我建议你把退火温度设置在50.2摄氏度至51.9摄氏度这个范围内,当然也可以采用Touchdown方法.

对的没有问题退火温度太高了 55吧你确定扩出来了么

这种情况一般和酶切位点关系不大。你应该首先确定在不加酶切位点的情况下，是否能做出PCR。加上酶切位点对PCR的条件影响并不大。如果在没有酶切位点的情况下，还做不出，那说明你要么是底物浓度太低，或者引物序列有问题。

我想问问我加的酶切位点和保护碱基对不对AIF-ECOR1：cg gaattc gctacaagcacgctctaacatct AIF-BAMH1: c ggatcc cggactctgtctcactctctgat 保护碱基和酶切位点我用空格分开了,好辨认!扩出来后准备双酶切后连接质引物加了保护碱基和酶切位点（共14个碱基）后退火温度需要调整吗? 设计引物的时候,酶切位点的前面的保护碱基应该怎么加,遵循什么原则. 各位看看我的引物酶切位点和保护碱基有什么问题吗5’-CCTGAATTCATGGCTAGCCTTCTCA-3’5’-CCGCTCGAGTATTTA ATTGAATAGTT-3’ MboI 内切酶的酶切位点保护碱基? 酶切位点保护碱基 PCR时引物的概念包括加进去的酶切位点和保护碱基嘛?算进引物的长度吗?一块分析嘛?我设计的下游引物只有15个碱基,但primer5上的长度18个,如果我删去三个就不配对了（只是下游引物）,影响 rsrii酶切位点的保护碱基是什么啊?有哪位高人知道rsrii这个酶切位点的保护碱基是什么啊?我最近要设计引物用到这个酶切位点的,可查不到它的保护碱基, 做克隆时,请问在引物前加的一段保护碱基和内切酶序列需要和cDNA互补吗? 引物18个碱基互补序列,Tm值60左右,加上酶切位点和保护碱基后,Tm值就72了,这么高Tm行吗?能帮我看下,这样设计的引物对吗ATGC TCTAGA GC TCAGATGTCCACGTCCCG前面四个和第11、12个（GC）是保护碱基,中间6 请教各位我设计引物加了酶切位点和六个保护碱基,结果扩出来的片段短了,缺少我之前设计引物那段互补片段请教各位我设计引物能扩增出目的片段,测序结果正确,设计表达引物直接在上面加我从PMD18-T上克隆目的基因,用的是Ecor I 和Not I酶切位点,引物Not I只有一个保护碱基,这样可以吗? 我想问我画的电路图对不对那个A+B和A*B我写的对不对? HincII这个酶的保护碱基是什么酶切位点加保护碱基的目的是什么? 计算目的蛋白是多大,怎么算,还有什么标签的,那个要另外加吗我在PET-28a的HINDⅢ和BamHⅠ的两个酶切位点上插入了一段380bp的目的基因,没加启动子和终止子,用载体上的,我想问问载体上有好几任何PCR引物都需要加保护碱基嘛?