降解的DNA能做PCR吗?我用酚-氯仿抽提的DNA,经凝胶电泳后发现DNA存在降解的情况,请问这样的标本做PCR的话对结果会有什么影响呢?
来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2024/12/23 22:07:26
降解的DNA能做PCR吗?我用酚-氯仿抽提的DNA,经凝胶电泳后发现DNA存在降解的情况,请问这样的标本做PCR的话对结果会有什么影响呢?
降解的DNA能做PCR吗?
我用酚-氯仿抽提的DNA,经凝胶电泳后发现DNA存在降解的情况,请问这样的标本做PCR的话对结果会有什么影响呢?
降解的DNA能做PCR吗?我用酚-氯仿抽提的DNA,经凝胶电泳后发现DNA存在降解的情况,请问这样的标本做PCR的话对结果会有什么影响呢?
PCR扩增原则上对你模板要求不高,因此单纯降解对PCR结果影响不大,除非你做长PCR,或者进行多态分析(如RAPD).但是你单纯用酚-氯仿抽提,可能会造成DNA里面蛋白、酚、氯仿和其他杂质较多,因此会影响PCR结果.因此建议你进行260/280,230/260分光光度计测定.如果比值异常,建议你对DNA进行纯化,纯化可以采用酒精沉淀方法进行.
目前大多数实验室已经很少用酚-氯仿抽提来进行DNA提取,除非实在是想节约经费.如果经费允许,可以使用试剂盒进行提取,目前国产试剂盒一个样品2-3元,进口约10-15元,效果很好.提取DNA进行PCR没有问题.
有影响的,PCR后的产物就可能和你的目的产物存在差别,如果再转染或者继续下面的实验应该有影响的.
建议找到降解的原因改进.
降解很正常,要看你所p的片断大小了,为降解的dna中 由你所需的片断,通过添加引物,仍可p出来
一般PCR对模板的要求不高,降解通常不会有什么大影响的
一般如果做遗传多样性的话,降解的DNA就不要用了
有可能p不出来
如果你做基因的话有可能p出来
不过最好不讲解,想上面说的一样。用试剂盒提
如果不用试剂盒
有纯化的方法
一般只要RNA含量不多是不会影响pcr的