要扩增3000左右的目的片段,但是设计的上下游引物的GC含量差异很大,如何是好?急求……即起始密码子之后和终止密码子之前的部分,GC差异很大……

要扩增3000左右的目的片段,但是设计的上下游引物的GC含量差异很大,如何是好?急求……即起始密码子之后和终止密码子之前的部分,GC差异很大…… PCR扩增问题今天PCR,扩增的目的片段大概是1000bp,但是扩增出来的大概在2000bp左右,想问一下这个是什么原因,解决这个问题的方法是什么 已知一个基因的mRNA和cDNA,我想克隆此基因,进行转染表达,但是设计的引物无法扩增出目的片段……急求!我目的片段大小为2800,载体为eGFP-N1,设计引物中,我是取了ATG开始的前20个左右的碱基,加 PCR引物设计问题如果我设计的引物,扩增出来的目的片段长度为200BP,但是石蜡包埋组织提取出来的DNA模板大多数在100-120BP长度,那该如何.模板比理论上要扩出来的目的片段长度还短,怎么解决 设计的引物扩增出两条大小相近的片段怎么办 对于一段有重复序列的片段如何扩增,只是一个基因的中间的部分序列,准备扩增做overlap.我在两端设计的无配对引物,无法扩增目的条带,不知对PCR 条件有什么要求? pcr为什么要扩增,PCR的目的是获得目的基因片段?但为什么要扩增很多次呢,小菜题不懂.为什么要大量呢 为什么设计引物时要在待扩增片段的两侧 现在在做5,RACE.扩增出目的条带后胶回收,然后用特异性引物去嵌套验证,结果也有目的大小的条带扩增出来回收的片段1K左右 PCR 产生比目的片段小的片段,这是怎么回事,怎么样处理?PCR扩增时,电泳后发现的得到的片段远远小于目的片段.目的片段曾今扩增出来过?这是什么原因,怎么样处理 . 如何确定这个是否是我要的目的基因序列?本人需要获得一个未知的基因,通过设计引物PCR扩增获得了一个片段,但是在进行Blast比对时,选择Highly similar sequence 的话找不到显著相似的序列,而选择 pcr扩增目的片段时,在第几个循环后才能出现目的片段长度的双链DNA分子? 自己设计比较完美的引物有个别扩增不出来目的片段或者扩增不够理想,请问是什么原因?有什么方法解决?做梯度PCR也没什么效果,请问该怎么解决? 我想问根据同一个基因设计的两个引物,都在小麦中扩增,扩增片段大小是否一样? 细菌基因组DNA 的PCR扩增问题我提取了革兰氏阴性菌的基因组DNA并用几种不同的引物对其进行PCR扩增,意在扩增一段特定的基因片段,其中一对引物扩增出了两条带,一条500bp左右,为目的条带,另 通过设计带酶切位点的PCR引物来使目的片段添加限制性酶切位点的原理是什么?百思不得其解,我的意思是说引物人为添加上的酶切位点与要扩增的片段也不匹配,怎么能随着引物克隆到目的片 大家好,问一个不能等到台面上的问题：目的基因片段是扩增片段吗?什么是RT-PCR的目的基因片段,谢谢 PCR在扩增长片段的设计引物时需要注意什么?