检测蛋白质的反应有那几个呢?茚三酮反应可以不
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/12/25 14:54:46
检测蛋白质的反应有那几个呢?茚三酮反应可以不
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检测蛋白质的反应有那几个呢?茚三酮反应可以不
凯氏定氮法、双缩脲法(Biuret)、紫外吸收法、考马斯亮蓝法（Bradford）
1.1 原理
凯氏定氮法测定蛋白质分为样品消化、蒸馏、吸收和滴定4 其原理是样品中含氮有机化合物与浓硫酸在催化剂作用下共热消化,含氮有机物分解产生氨,氨又与硫酸作用,变成硫酸铵.然后加碱蒸馏放出氨,氨用过量的硼酸溶液吸收,再用盐酸标准溶液滴定求出总氮量换算为蛋白质含量.
2 双缩脲法(Biuret )
2.1 原理
双缩脲(NH3CONHCONH3)是两个分子脲经180 ℃左右加热,放出1 个分子氨后得到的产物.在强碱性溶液中,双缩脲与CuSO4 形成紫色络合物,称为双缩脲反应.凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键,或能够以1 个中间碳原子相连的肽键,这类化合物都有双缩脲反应.紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比,而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关,故可用来测定蛋白质含量.
3 紫外吸收法
3.1 原理
蛋白质分子中,酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键,使蛋白质具有吸收紫外光的性质,吸收峰在280 nm 处,其吸光度(即光密度值)与蛋白质含量成正比.此外,蛋白质溶液在238 nm 的光吸收值与肽键含量成正比.利用一定波长下,蛋白质溶液的光吸收值与蛋白质浓度的正比关系,可以进行蛋白质含量的测定.
4 考马斯亮蓝法( Bradford)
4.1 原理
Bradford 法是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的.考马斯亮蓝是一种有机染料,在游离状态下呈红色,在稀酸溶液中与蛋白质的碱性氨基酸（ 特别是精氨酸）和芳香族氨基酸残基结合后变为蓝色,其最大吸收波长从465 nm 变为595 nm,蛋白质在1～1 000 μg 范围内,蛋白质－色素结合物在595 nm波长下的吸光度与蛋白质含量成正比,故可用于蛋白质的定量测定.
茚三酮反应：所有氨基酸及具有游离α-氨基的肽与茚三酮反应都产生蓝紫色物质,只有脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应产生（亮）黄色物质.虽然蛋白质和多肽具有茚三酮反应,但是肽链越大,灵敏度越差姑不适合作为定量测定.