大片段连接我载体有氨苄和链霉素抗性,大约8000bp,片段有氯霉素抗性,4500bp,都是经过BamHI单酶切回收的,现在连接以后转化于3种抗生素的平板上,一直都不长,4度和16度都试过了,载体要去磷酸化

大片段连接我载体有氨苄和链霉素抗性,大约8000bp,片段有氯霉素抗性,4500bp,都是经过BamHI单酶切回收的,现在连接以后转化于3种抗生素的平板上,一直都不长,4度和16度都试过了,载体要去磷酸化 双酶切老是切不完全我PCR克隆了一段200bp的基因片段,然后连接到了T载体,引物2端各有EcoRI和HindIII的酶切位点,但现在将T载体进行双酶切,缺总是切不完全,只有大约1/3的载体被切开,所以200bp的条 大片段的RT-PCR现在在做RT-PCR,目的片段5500多bp,用什么样的反应体系和条件能P出来啊?..希望知道或做过这方面实验的帮帮忙,如果p出来,下一步用什么载体连接最好,实验室里有T3、pMD19-Tps：我的 转化后PCR无条带把连接产物连接到T载体之后转化大肠杆菌,用连接产物片段上有而T载体上没有的Kana抗性进行筛选,有转化子长出.培养转化子后PCR,却扩增不出目的条带（即之前的连接产物,约3k 您好!目的基因跟载体片段连接后成重组质粒,那里面的那些溶液会影响接下来的酶切鉴定吗就是把目的基因和载体片段连接起来的那个连接体系里面的溶液,我接下来要坐酶切鉴定,会对其有影 连接然后转化大肠杆菌注意事项我有一段1.8K左右的片段,用T载体和连接酶连接,然后转化细菌,老是长不出来菌,什么斑也没有,请高人帮忙找找原因. 目的基因片段与载体DNA连接的主要有? 为什么构建克隆载体不需T4连接酶为什么PCR扩增出的DNA片段和克隆载体pMD 18-T连接不需T4连接酶,而和表达载体连接就需要T4连接酶. 为什么载体和DNA片段都要酶切? 转化pET32a一个菌落也不长是什么原因啊我在做分子克隆,克隆了四个片段,要在pET32a载体上表达,可是酶切,连接,转化大肠杆菌BL21以后一个菌落也不长,我已经试过各种载体和目的片段的比例,而 目的片段连接表达载体后酶切出非特异带为什么我的载体11KB,连接了目的片段.PCR能扩出目的带,双酶切出现了三条带,一条载体,一条目的条带,一条非特异带3KB左右.载体上这两个酶只有一个酶 硫酸链霉素和链霉素有什么区别我要培养真菌,培养基成分中有链霉素,但是现在市场上买不到链霉素,只有硫酸链霉素,所以想问一下硫酸链霉素与链霉素的区别,能否用硫酸链霉素代替来培养 如果将PCR扩增的X基因片段与克隆载体连接,并转化入宿主大肠杆菌中,写出技术路线（包括基因和载体的连接、转化和鉴定）和关键点. 链霉素和硫酸链霉素的区别 PCR产物TA克隆,PGEM-T 载体+目的片段,那么转化挑克隆提取的质粒片段是多大?PCR产物TA克隆,PGEM-T 载体的序列是大约3000bp,PCR产物的目的片段是450bp,那么：经过连接、转化后挑单克隆,提取质粒,提 基因连接载体和片段比例问题假如载体和目的片段浓度分别是10和40纳克每微升,载体和目的片段长度分别为4kb和1kb,各取一微升,摩尔比为1：4,请问这个计算结果对吗,很困惑, 我有一个转植物的载体,转基因抗性标记基因是barstar,请问如何选择除草剂进行抗性筛选?浓度用多少? 如何画出连有目的片段的载体结构图?想做个示意图,就是一个载体结构图和一个目的片段图（ORF）,两个图拉一个二合一的箭头,下面一个连接后的载体结构图,并标明了目的片段具体的位置的