pcr杂带在目的条带之上.以前有做过同样的程序,同样的引物和酶.p细菌时,若1492r/27f,则在大于1500bp处有杂带,但比目的条带弱.用357fgc和518r时,则在400bp左右有杂带,而200bp的目的条带也不亮.消除杂
来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2025/01/30 13:22:23
pcr杂带在目的条带之上.以前有做过同样的程序,同样的引物和酶.p细菌时,若1492r/27f,则在大于1500bp处有杂带,但比目的条带弱.用357fgc和518r时,则在400bp左右有杂带,而200bp的目的条带也不亮.消除杂
pcr杂带在目的条带之上.以前有做过同样的程序,同样的引物和酶.
p细菌时,若1492r/27f,则在大于1500bp处有杂带,但比目的条带弱.用357fgc和518r时,则在400bp左右有杂带,而200bp的目的条带也不亮.消除杂带
以前有做过同样的程序,同样的引物和酶,同样的体系,结果很好,只出现目的条带,不知为何现在做的会出现杂带。
pcr杂带在目的条带之上.以前有做过同样的程序,同样的引物和酶.p细菌时,若1492r/27f,则在大于1500bp处有杂带,但比目的条带弱.用357fgc和518r时,则在400bp左右有杂带,而200bp的目的条带也不亮.消除杂
细菌DNA是怎么获得的?是菌落PCR还是抽提的基因组DNA?是新鲜制备还是之前保存的核酸?
通常在已经确认的系统中出现这种类型的杂带,除了模板的问题,多半认为是系统中有东西污染了.需要在电泳中检测阴性对照(不加模板的PCR反应体系),确认系统没有污染.也需要重新制备模板,并尝试减少模板用量,看是否能改善情况.
可能有以下几种情况:
一,误差性,即便是用同样的东西,同样的程序,分别两次来做,出现的结果也可能是不一样的,因为每次取的东西,用的PCR仪都会有误差。
二,可能是主要的原因,所用的引物质量不是太好。
建议:一种是用现在的引物,将PCR的退火温度提高。另一种是换一家好的公司重合引物。...
全部展开
可能有以下几种情况:
一,误差性,即便是用同样的东西,同样的程序,分别两次来做,出现的结果也可能是不一样的,因为每次取的东西,用的PCR仪都会有误差。
二,可能是主要的原因,所用的引物质量不是太好。
建议:一种是用现在的引物,将PCR的退火温度提高。另一种是换一家好的公司重合引物。
收起
这种情况我遇见很多次,最终发现,其实是引物放时间久了部分降解的缘故。你重新合成引物就好了。