荧光定量pcr标准曲线中的扩增效率太高怎么办做荧光定量标准曲线,同时做内参β-actin和自己的基因SA,结果内参相关系数为1.000,扩增效率为99.7%,SA相关系数为0.990,扩增效率为137.3%,初始模板浓度
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/12/22 18:25:52
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荧光定量pcr标准曲线中的扩增效率太高怎么办
做荧光定量标准曲线,同时做内参β-actin和自己的基因SA,结果内参相关系数为1.000,扩增效率为99.7%,SA相关系数为0.990,扩增效率为137.3%,初始模板浓度为2,按-4倍稀释,得怎么改条件,
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1、调整下体系,不要自己配置反应液,最好用商品的MIX,这样各个组分都是最佳的配比.
2、三步法改为两步法,退火延伸设置为一步,大部分的温度为60度,这个只是建议,具体看你买的试剂的说明书,会有具体的说明.
3、很有可能有非特异性扩增,自己排查下反应体系,根据溶解曲线是否单峰,扩增曲线CT值综合分析.
提高退火温度试试，如果是三步法的话改成两步法试试哦，请问您可以详细讲解一下两步法和三步法的做法吗，不是很清楚，谢谢举个栗子 两步法： 95° 20s，60° 30s，40个循环 三步法： 95° 20s，60° 30s，72° 30s，40个循环 两步法比三步法少了72° 那个过程...
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提高退火温度试试，如果是三步法的话改成两步法试试
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