PCR引物设计原则在许多地方看过这么一句话：引物长度不能过长,否则导致延伸温度大于74℃,即Taq酶的最适反应温度,因而不适用于延伸反应.不知该如何理解呢?据我了解,引物长度只与退火温

来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2025/01/31 06:07:01
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PCR引物设计原则在许多地方看过这么一句话：引物长度不能过长,否则导致延伸温度大于74℃,即Taq酶的最适反应温度,因而不适用于延伸反应.不知该如何理解呢?据我了解,引物长度只与退火温
PCR引物设计原则
在许多地方看过这么一句话：引物长度不能过长,否则导致延伸温度大于74℃,即Taq酶的最适反应温度,因而不适用于延伸反应.不知该如何理解呢?据我了解,引物长度只与退火温度有关,若引物较长,提高退火温度保证其与模板结合的特异性,然后调整温度到Taq酶的最适温度进行延伸反应不可以吗?
请路过的朋友们多多指教!

PCR引物设计原则在许多地方看过这么一句话：引物长度不能过长,否则导致延伸温度大于74℃,即Taq酶的最适反应温度,因而不适用于延伸反应.不知该如何理解呢?据我了解,引物长度只与退火温
引物长度与延伸温度基本呈正比,还影响PCR的特异性.
延伸温度一般在酶活性温度附近,从而去调整引物长度.
引物长度的上限并不很重要,主要与反应效率有关.由于熵的原因,引物越短,它退火结合到靶DNA上形成供DNA聚合酶结合的稳定双链模板的速率越大.一般,如果扩增有一定程度不均一性的序列,则需要28~35个碱基长的寡核苷酸链作引物.

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