pUC19连接了大于3kb的片段,提取质粒时质粒变小了,丢了600bp,这样我就测不到目的基因序列,怎么办?

pUC19连接了大于3kb的片段,提取质粒时质粒变小了,丢了600bp,这样我就测不到目的基因序列,怎么办? 目的片段连接表达载体后酶切出非特异带为什么我的载体11KB,连接了目的片段.PCR能扩出目的带,双酶切出现了三条带,一条载体,一条目的条带,一条非特异带3KB左右.载体上这两个酶只有一个酶 我在构建质粒：载体大小为9kb,目的片段为3.4kb,连接产物可以用普通的热击方法转化感受态Ecoli.DH5a吗? 分析碱裂解法提取的质粒DNA电泳图,M：Puc19质粒作为Marker,泳道1、2、3、4都跑出两条带分别是什么?哪一条带是双螺旋DNA?另一条是什么变性超螺旋质粒还是开环DNA? 我扩增的这段片段能否提交到NCBI GENEBANK?我根据已报道的cDNA全长序列,用特异引物扩增了一段保守的片段,用作探针.这段片段1kb,原来的全长是3.5kb.我得到的这段片段能否提交到genebank里?我为了 在我做的载体与片段连接中,在转化后,酶切后质粒是不长的,而重组后的长了,可是,最后结果却是.结果是,片段根本没有连进去,连进去的却是一个远远大于我的目的片段的碱基序列,这是为什么 PCR产物TA克隆,PGEM-T 载体+目的片段,那么转化挑克隆提取的质粒片段是多大?PCR产物TA克隆,PGEM-T 载体的序列是大约3000bp,PCR产物的目的片段是450bp,那么：经过连接、转化后挑单克隆,提取质粒,提 冈崎片段是怎么连接的?冈崎片段是用什么东西连接的? 载体和目的片段连接目的片断与载体的摩尔比大于3-10：1.摩尔数怎么确定?除了用分光光度计测OD,同门说跑胶能估算,请问怎么估算?这个比例对结果影响很大吗? matlab怎样提取提取一个矩阵中的某些元素?比如Y=[12 3 30 4 5 10 23 41 2 32]我想令Y1为Y中所有大于等于10的元素,请问应该怎么弄?谢谢了 大肠杆菌PUC19的质粒碱基序列能用什么内切酶可以将大肠杆菌PUC19的质粒切成一个直链?只切一次 很大的质粒如何酶切连接,如载体13k,片段3k ps怎么改图像大小一个100kb大小的图片怎么改成不大于20kb的图片? 转化克隆E.Coli的空白对照长成了一片,加了PUC19的抗性板则只长了几个,请问这是E.Coli的抗性出了问题吗? 谁有中外名人描写绿的片段?片段篇幅不要太长,2至3个片段就行了 小片段DNA的PCR扩增程序我要扩的DNA片段138KB扩了很多次都没有扩出来,想问问大家,谁扩过这么小的片段,PCR程序是怎么设定的本人要扩增的是138bp的小DNA,怎么也扩不出来,不知道该怎么办.我的上 pMD-19T是由puc19改造而来的,就是在多克隆位点处插入了一个Ecor V酶切位点,为什么就不能用于表达外源基为什么就不能表达外源基因了？ 大片段连接我载体有氨苄和链霉素抗性,大约8000bp,片段有氯霉素抗性,4500bp,都是经过BamHI单酶切回收的,现在连接以后转化于3种抗生素的平板上,一直都不长,4度和16度都试过了,载体要去磷酸化