对基因片段进行测序的目的,以及直接测序和克隆测序的区别和适用条件!基础有点薄弱,谢谢赐教!

对基因片段进行测序的目的,以及直接测序和克隆测序的区别和适用条件!基础有点薄弱,谢谢赐教! 关于基因测序的几个问题!1.在建库过程中,我们是先对RNA进行片段化后合成cDNA还是先用RNA合成cDNA再对cDNA进行片段化?为什么要这样做?2.什么是index测序和非index测序,进行index测序的主要目的是 表达质粒构建中,做带有目的基因片段的pcr之前,需要对带有目的基因片段的质粒进行酶切吗?... 采用通用引物对插入到质粒克隆载体中的基因片段进行测序,t3 引物读出来的数据是该基因的5'端还是3'端?采用通用引物对插入到质粒载体(pBluScript)中的基因片段进行测序,t3 引物读出来的数据 基因测序结果与应有序列比较是否一致,可以用什么软件来检测?用T载体连接上了目的基因进行测序,现在测序的结果出来了,要从中比对找到目的基因,看看测出来的序列和应有的序列是否一致, PCR片段直接测序和PCR片段经克隆后测序的结果有何区别? 关于454焦磷酸测序的原理问题测序过程到底是如何进行的?我知道每有一个碱基匹配正确就会发出荧光,但我的问题如下：每个磁珠上的单克隆是同个目的基因的不同片段还是不同的目的基因, 如果PCR产物可以直接用来测序,但为什么还需要买PCR产物纯化试剂盒,还要进行连接转化提质粒酶切?我的实验是在PCR产物电泳后发现有自己所需要的长度的目的片段.如果直接测序和经过连接转 如何进行目的基因和目的的cDNA的筛选? 克隆测序结果找不到目的片段的引物序列 关于含目的基因受体的筛选的问题将切割后的质粒和目的基因片段混合,会出现三种情况：质粒自连,目的基因自连,质粒和目的基因连在一起,而利用质粒上的标记基因如四环素的抗性基因进行 精氨酸置换突变成赖氨酸后对蛋白质功能的影响?最近从别人那里要的目的基因缺失突变体,不同的片段,测序发现每一段3‘端都有移码突变（与NCBI该基因mRNA序列比对后缺失一个碱基）,很是郁 对PCR扩增后的目的基因如何进行提取 请教各位我设计引物加了酶切位点和六个保护碱基,结果扩出来的片段短了,缺少我之前设计引物那段互补片段请教各位我设计引物能扩增出目的片段,测序结果正确,设计表达引物直接在上面加 基因工程中为什么用两种酶切质粒和带有目的基因的dna片段?用一种酶切会怎么样? 关于 克隆的问题.假如我有有一个基因片段,未知序列.我可以把它连接到T载体,然后PCRPCR 用T载体PRIMER,然后测序,然后酶切出片段---------》从而达到得到很多此片段的目的.这个做法行么?或者别 真核细胞的基因含有不表达的DNA分子.（1）为什么就不能直接扩增和表达呢?为什么一般使用人工合成的方法?（2）如果用PCR扩增技术对目的基因进行扩增得到含有内含子的基因,不是一样可以 我有一些基因的片段,想对这些片段进行生物信息学分析,我都该怎么分析啊