我设计引物改变了一个序列中的2个碱基.我要如何用PCR来验证这一改变?

我设计引物改变了一个序列中的2个碱基.我要如何用PCR来验证这一改变? 如何在NCBI上寻找要扩增的序列?我要用PRIMER 设计引物.位点是CYP2C19*2,是一个SNP的位点.我在NCBI里查到了这个基因的信息.现在我有3个问题如下：1.引物设计的对象是FASTA中的序列还是GENEBANK中的 引物18个碱基互补序列,Tm值60左右,加上酶切位点和保护碱基后,Tm值就72了,这么高Tm行吗?能帮我看下,这样设计的引物对吗ATGC TCTAGA GC TCAGATGTCCACGTCCCG前面四个和第11、12个（GC）是保护碱基,中间6 测序：中间碱基有缺失我在NCBI下载了一段已知基因序列,然后设计引物重复,以外发现有一段缺失,少94个bp,这样后面的编码都打乱了,想请教这种情况, 请问各位大侠 如果我有两条引物这两个引物上游序列只有一个碱基不同,下游序列完全相同,可以叫公共引物吗 克隆2500个碱基,该设计多长的引物呢?我准备克隆2500个碱基,引物是不是应该长一点? 我需要设计引物,是不是得知道所有的基因序列了? PCR引物设计问题我是要扩增一个片段,加上双酶切位点,片段就那么大,我就需要那么大加酶切位点?这引物怎么设计?是不是只要5‘端序列,以及3’端的反向互补序列加上酶切位点和保护碱基就 我的引物设计有30个碱基,tm值分别为88和84,是不是太高了?那退火温度怎么设定啊? PCR中引物是和谁要互补1.PCR中引物是要和哪条链互补?是我要测目的基因的链,还是其互补链?2.设计的引物可以通过序列库查到其碱基的表达,那么过去设计引物,有很多未知的序列,过去的人怎么 已知一个基因的mRNA和cDNA,我想克隆此基因,进行转染表达,但是设计的引物无法扩增出目的片段……急求!我目的片段大小为2800,载体为eGFP-N1,设计引物中,我是取了ATG开始的前20个左右的碱基,加 克隆设计引物插入酶切位点的问题我要对真菌的全序列进行克隆,设计引物时是不是讲酶切位点插入到5’端就可以了?加的保护基团在酶切位点之前加就可以吗,它是随便的三个碱基吗?限制性 荧光定量PCR引物中含简并引物可以吗?设计荧光定量PCR引物时,保守片段中,上游引物有一个碱基不保守,下游引物有2个碱基不保守,因此在该位置设计为简并引物,不知道这样做可不可以?另外说 【Help】所p片段内含有与引物高度相似的片段该如何设计引物PCR我要P一个基因,Forward要带入一段酶切位点（XbaI）,但是基因的头二十多bp的碱基和序列内500多和800多的地方分别有两个高度相似 六个碱基能确定一个酶的基因吗我基因测序只测出了一端的序列,长度是910bp,但是太长了,其中的6个基因能确定一个酶的基因吗 PCR扩增时RNA引物序列设计时,引物序列是与目标基因前的序列互补呢,还是与目标基因互补?我也遇到了这样的问题,做负链RNA病毒RT-PCR的时候,我不知道以哪个为模板设计引物,是用原始序列设计 我想知道人类基因组碱基序列 请教各位我设计引物加了酶切位点和六个保护碱基,结果扩出来的片段短了,缺少我之前设计引物那段互补片段请教各位我设计引物能扩增出目的片段,测序结果正确,设计表达引物直接在上面加