PCR的产物跑琼脂糖凝胶电泳时,所有样都不出现条带,而是弥散状的,从投拖到尾,而maker却是好的,说明不是电泳的问题,我把所有的酶,buffer,Mg+都换了一遍了还是找不到原因,结果照旧,重新合成了
来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2025/01/30 19:25:42
PCR的产物跑琼脂糖凝胶电泳时,所有样都不出现条带,而是弥散状的,从投拖到尾,而maker却是好的,说明不是电泳的问题,我把所有的酶,buffer,Mg+都换了一遍了还是找不到原因,结果照旧,重新合成了
PCR的产物跑琼脂糖凝胶电泳时,所有样都不出现条带,而是弥散状的,从投拖到尾,而maker却是好的,说明不是电泳的问题,我把所有的酶,buffer,Mg+都换了一遍了还是找不到原因,结果照旧,重新合成了引物还是不行.同样的材料另外一对引物就能做出来.我都做了两个月了,大家帮帮忙吧~
PCR的产物跑琼脂糖凝胶电泳时,所有样都不出现条带,而是弥散状的,从投拖到尾,而maker却是好的,说明不是电泳的问题,我把所有的酶,buffer,Mg+都换了一遍了还是找不到原因,结果照旧,重新合成了
“从头拖到尾,另外一对引物就能做出来”
说明不是引物之间形成二聚体,而是第一对引物的设计有问题(特异性很差).如果一定要扩增那个区,建议引物的位置向两边放一放.如果你没有好的设计软件,建议到Primer3去试试(目前最好的免费引物设计).
如果还是不行,把序列发给我,我帮你设计(我有专业软件,ABI primer express 3 和 Invitrogen Vector NTI 10)
老兄你说的啥子嘛?根本看不懂 估计看不懂的大多 从此飘过留根毫毛
看不懂废话毛
说明你的引物不是一般的差。第一步是提高退火温度试试,还是不行就只能按照一楼说的重新设计。
可能就是引物特异性的问题,到网上再重新设计一个吧
引物设计问题,引物特意性差,3‘端gc比太高,或者有引物落入了串联重复序列中。建议做一下primer-blast看一下是什么问题,然后重新设计