菌液直接PCR我的pcr体系是50微升的,预变性时间5分钟,模板7微升,我接种单菌落到增菌液,以往都是煮沸了制模板然后pcr鉴定是不是我要的细菌,听说可以用菌液直接pcr,不知道预变性时间该改为多
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/12/23 07:55:42
菌液直接PCR我的pcr体系是50微升的,预变性时间5分钟,模板7微升,我接种单菌落到增菌液,以往都是煮沸了制模板然后pcr鉴定是不是我要的细菌,听说可以用菌液直接pcr,不知道预变性时间该改为多
菌液直接PCR
我的pcr体系是50微升的,预变性时间5分钟,模板7微升,我接种单菌落到增菌液,以往都是煮沸了制模板然后pcr鉴定是不是我要的细菌,听说可以用菌液直接pcr,不知道预变性时间该改为多少,菌液体积应加多少,其他还要做什么修改,做出来和煮模板做区别大吗?
菌液直接PCR我的pcr体系是50微升的,预变性时间5分钟,模板7微升,我接种单菌落到增菌液,以往都是煮沸了制模板然后pcr鉴定是不是我要的细菌,听说可以用菌液直接pcr,不知道预变性时间该改为多
其实你原体系中7微升都太多了.我做50微升体系最多加3微升模板.
菌液PCR只需要用枪头沾取菌落,或者加入2微升左右菌液即可.预变性时间可稍微延长.如果引物特异性好的话,和用DNA模板效果差不多.
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鉴定为目的的菌落PCR，我通常只用20μL体系，20μL体系就够了，不就是看个有没有嘛，多了浪费试剂。
20μL里面作为模版的菌液，我只加0.2~0.3μL（1%~1.5%，尽量减少对PCR体系的干扰，而且可以减小非特异性结合的发生）；如果是固体菌落，那更是微乎其微——事实上更少的体积都没问题，但是2.5μL的枪最小只能到0.2μL，0.1μL那是扯淡。
变性时间，如果...
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鉴定为目的的菌落PCR，我通常只用20μL体系，20μL体系就够了，不就是看个有没有嘛，多了浪费试剂。
20μL里面作为模版的菌液，我只加0.2~0.3μL（1%~1.5%，尽量减少对PCR体系的干扰，而且可以减小非特异性结合的发生）；如果是固体菌落，那更是微乎其微——事实上更少的体积都没问题，但是2.5μL的枪最小只能到0.2μL，0.1μL那是扯淡。
变性时间，如果按1%加的话，只需要95℃总共3分钟就绰绰有余了，也就是2.5min+第一个循环的0.5min
PS：
如果你用的是含Mg2+的培养基，那加多了菌液会把体系的Mg2+浓度提高，将替PCR的特异性。
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