一对引物扩增条带竟然有两条,除了非特异性扩增的可能还有别的原因么?大家有没遇到这种情况啊?

来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2024/11/16 09:23:06
一对引物扩增条带竟然有两条,除了非特异性扩增的可能还有别的原因么?大家有没遇到这种情况啊?一对引物扩增条带竟然有两条,除了非特异性扩增的可能还有别的原因么?大家有没遇到这种情况啊?一对引物扩增条带竟然

一对引物扩增条带竟然有两条,除了非特异性扩增的可能还有别的原因么?大家有没遇到这种情况啊?
一对引物扩增条带竟然有两条,除了非特异性扩增的可能还有别的原因么?大家有没遇到这种情况啊?

一对引物扩增条带竟然有两条,除了非特异性扩增的可能还有别的原因么?大家有没遇到这种情况啊?
应该是非特异扩增了,但是非特异扩增也分好几种情况呢,首先要看你的扩增产物是非常特异的两条带还是出了两条较为明显的还有其他杂带,如果是前者,那么很可能是由于你的引物在模板上不止有一个结合位点造成的,这种情况下你需要做的就是重新设计引物并合成,重新进行扩增;如果是后者,那么由扩增条件不适合造成非特异扩增的可能性大一些,这个时候你就需要重新摸索扩增条件,一般扩增体系内模板,引物,或者mg2+加多了会造成多条扩增产物的出现,而对PCR来讲影响最大的莫过于引物的退火温度,提高退火温度可以有效的减少非特异扩增.
从目前你的情况来看,建议你先尝试提高退火温度,减少模板用量,如果都不管用,只好重新设计引物来试试了~祝好运

1 非特异性扩增。
2 模板有重复序列。
3 模板中DNA具有序列长度多态。

这种情况很正常的,我有时候有三条以上的非特异条带,除了目的条带,其他的就是非特异的条带的嘛,这个可以通过调节PCR条件来改善的
你先确定非特异的那条是比目的条带长还是短?长的话,改变PCR扩增条件,可以考虑缩短退火和延伸时间;短的话提高退火温度。
顺便说一下,如果你是RT-PCR的话可能是你的引物设计的时候没有跨在2个外显子上,导致PCR拉出了基因组含内含子的片段...

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这种情况很正常的,我有时候有三条以上的非特异条带,除了目的条带,其他的就是非特异的条带的嘛,这个可以通过调节PCR条件来改善的
你先确定非特异的那条是比目的条带长还是短?长的话,改变PCR扩增条件,可以考虑缩短退火和延伸时间;短的话提高退火温度。
顺便说一下,如果你是RT-PCR的话可能是你的引物设计的时候没有跨在2个外显子上,导致PCR拉出了基因组含内含子的片段

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一对引物扩增条带竟然有两条,除了非特异性扩增的可能还有别的原因么?大家有没遇到这种情况啊? 进行PCR扩增为什么扩不出目的片段?就连非特异性条带也没有,引物与模板分得清清楚楚 我自己用primer5.0和oligo6.0引物设计软件,设计了一对特异性引物老是有非特异性条带 小片段DNA(100-200bp)的PCR扩增PCR模板是100bp-200bp的片段,用SSR引物扩增的时候,出现的不是单一的目的带,目的带出现的同时还有许多非特异性扩增条带,有时候就是条带扩不出来,对于小片段模板 pcr引物设计过程中,为什么GC过多易出现非特异性条带.为什么降低退火温度会使非特异性增高.跪求大牛指导 菌落pcr假阳性如图,菌落pcr,2-6道扩增0.9kb目的条带,7-12扩增1.0kb目的条带.7,8道扩增的1.0kb有点偏离,9道为非特异性扩增,12道在1.0kb位置有隐约条带,是否为非特异性扩增?mark跑直线,而条带两端上扬 什么是PCR技术的非特异性扩增? PCR后出现非特异性扩增是什么原因? PCR复性温度如何确定为什么要在最后延伸10min?是否有非特异性扩增产物(或引物二聚体),如何消除? PCR时,如果上下游引物Tm值相差较大该怎样设定反应程序?反应后有非特异性条带出现,只有一条,该怎样去除? western blot 出现非特异性条带,主要原因有哪些? western blot实验 非特异性条带啥意思 PCR扩增时出现特异性带和非特异性带?我想问什么是特异性带?什么是非特异性带? 细菌基因组DNA 的PCR扩增问题我提取了革兰氏阴性菌的基因组DNA并用几种不同的引物对其进行PCR扩增,意在扩增一段特定的基因片段,其中一对引物扩增出了两条带,一条500bp左右,为目的条带,另 引物与模板非特异性配对位点的碱基配对率小于70%什么叫非特异性配对位点? PCR反应有非特异性扩增怎么办PCR后跑胶,发现有非特异扩增,亮度比目的片段小,该怎么办呢?接下来要做酶切…谢谢!除了切胶纯化外,还有没有别的方法,比如通过调节PCR反应的条件( [求助] PCR产物条带很淡最近做的PCR一直条带很淡,已经调了一些条件,还是没有效果. 目前是这样的:目的片段大约2.5kb,退火温度55度,从电泳的结果看来目的条带很整齐,也没有非特异性扩增, 如果PCR没有任何扩增产物或产生许多非特异性产物,应如何分析解决