为什么菌液PCR 引物一个载体上的 一个是PCR片段上的 鉴定正确后 测序却完全不同?信号中断?另一次PCR是原片段引物的,也是正确条带；回答假阳性的都扯淡,是菌里构建好的载体模板不纯?肯定

为什么菌液PCR 引物一个载体上的 一个是PCR片段上的 鉴定正确后 测序却完全不同?信号中断?另一次PCR是原片段引物的,也是正确条带；回答假阳性的都扯淡,是菌里构建好的载体模板不纯?肯定 根据RNA序列设计的RT-PCR一对引物中为什么有一个同源引物,一个互补引物呢? 哪个T载体上没有SacI和BamHI这两个酶切位点?现在需要连T,但是Pcr引物两端加了SacI和BamHI这两个酶切位点,所以需要找一个合适的T载体. 构建的质粒,菌液PCR正确,质粒电泳却什么都没有,是怎么回事?我要将一个片段连接到载体上,片段长度：2588bp,载体：2686bp,是平末端链接,4度过夜,然后转化DH5a,蓝白筛选,用菌液PCR验证,引物用的 PCR扩增为什么要用正反向两个引物!而PCR测序反应只需一个引物呢? 请教:PCR中,怎样检测自己设计引物的特异性请教达人,怎样用primer5检测自己设计的引物与模板（一个含有目的基因的载体）间的特异性?请详细点,非常感谢! 一个引物PCR扩增出的多个条带为什么亮度会不同?用ISSR标记分析遗传多样性,一个引物的PCR扩增结果可以有多个条带,为什么有的条带很亮,有的条带就不太亮? 从NCBI上查找到的一个目的基因做PCR,设计引物时PCR产物长度是这个基因的全部序列吗?CAGTCTAATGATTACCGTCCTTCATACCACTTCACACCGGACCAGTACTGGATGAACGAGCCAAACGGCCTGATTAAAATCGGATCCACCTGGCACCTGTTCTTTCAACACAATCCGACGGCCAATGTATGGGGCAACA 我想在PCR产物上加一个酶切位点,请问正向引物和反向引物酶切位点系列一样吗? 为什么我将一个1.5kb的基因克隆到T载体上,送去测序总是少了一截呢,每次都是少了下游引物的那一截缺失的片段大小还不一样,这个基因我用引物扩下来的时候是正常的.连到T载体,测序就总是 我PCR产物大小141bp,纯化后,连接到pGEM-T载体克隆,使用M13通用引物,扩增片段长度是多少?我想知道假如用pGEM-T通用引物M13F 5'TGTAAAACGACGGCCAGT3'和M13 RV 5'CAGGAAACAGCTATGACC3'引物进行菌液PCR,扩增出的片段 我构建一个H2B-pEGFP-N1载体,但是pcr鉴定正常,酶切鉴定就是没有急死啦,感受态,酶切时间和酶都换过了我的那个要求说不能尽量避免引物二聚体,不过我的引物有,是不是只能重新设计引物了,还是 目的片段连接表达载体后酶切出非特异带为什么我的载体11KB,连接了目的片段.PCR能扩出目的带,双酶切出现了三条带,一条载体,一条目的条带,一条非特异带3KB左右.载体上这两个酶只有一个酶 pcr引物的作用 荧光定量pcr引物设计原理在做荧光定量PCR预试验,先用普通pcr仪器跑的,模板是用CDNA.在设计引物的时候是不是必须俩个外显子跨过一个内含子?就是上下游引物必须落在俩个外显子上?我就按这 为什么PCR引物设计中引物可以不从扩增序列两头开始?不从两头开始能得到上下游引物以外的序列吗? 表达载体测序的时候为什么需要引物呢.今天要测序,结果发现菌是表达载体,师兄说需要引物才能测,为什么呢. 我有一个100bp左右的目的序列,怎么设计pcr引物.还有,对于对于一个比较大的基因来说,为什么有人会从这个基因的中间设计引物,这样可以p出这个基因吗?