在RQ-PCR中,管家基因的引物应如何设置?
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/12/25 22:55:03
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在RQ-PCR中,管家基因的引物应如何设置?
在RQ-PCR中,管家基因的引物应如何设置?
在RQ-PCR中,管家基因的引物应如何设置?
housekeeping gene的引物设计与你想探测的目标基因引物设计方法相同,而且一般文献上都应该给出,遵照文献使用即可,一般问题都会出在目标基因的引物设计上.不过在q-PCR中,housekeeping gene 引物还需注意以下几点
1.首先找到合适的housekeeping gene,其表达应具有一致可参考性.
2.引物长度在17-22bp.
3.引物退火温度在57°-60°之间,并且各个引物之间的退火温度差异不能超过1°.
4.引物所扩增基因的大小在50-400bp间,通常不超过200bp为宜.
5.引物本身无自身折叠,或者两引物之间互补的情况存在.
6.引物设计所扩增的目标基因,最好是跨越两段外显子的区域,这保证引物所扩增的基因,全部来自mRNA转化的cDNA,而非基因组DNA.
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