引物设计基本原则是什么?
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/11/16 03:33:29
引物设计基本原则是什么?
引物设计基本原则是什么?
引物设计基本原则是什么?
引物设计的原则和试验目的是相关的.
如果是为了检测某一个片段有没有,那么只要考虑特异性和片段好不好扩就行了.一般片段大小控制在500bp左右,上下游引物在57-57度退火温度,引物互补情况不严重,不如不超过5个,单引物没有发卡结构,那么这样的引物就比较好用了.
但是如果是为了克隆基因,那么片段大小就固定了,我们只能在特定的一小段上设计上下游引物,只能尽量的在引物长度（尽量控制在21-25bp）、GC含量（尽量控制在40%-60%）等方面综合考虑.
引物设计的好,PCR的难度就降低了；引物设计的不好用,后续试验会有很大的难度.
如果有具体问题,可以逐一的提出具体的问,问的太笼统了不好回答.
祝你好运!不要太依赖软件.
有专门的引物设计软件，不用自己动脑了。呵呵。
一、可以使用oligo 6 或者DNAstar 等软件设计。用这些软件选择引物，主要就是看引物的稳定性，形成二聚体的可能性，退火温度等等参数。这些软件都可以从网上下载到解密版。
二、如果你的序列同源性不高，GC含量也还可以的话，可以使用一些经验性原则。比如
1. 寡核苷酸链退火温度用经验公式2x(A+T)+4x(G+C），一般用58度。不一定非是58
度，但用58度往往可以...
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一、可以使用oligo 6 或者DNAstar 等软件设计。用这些软件选择引物，主要就是看引物的稳定性，形成二聚体的可能性，退火温度等等参数。这些软件都可以从网上下载到解密版。
二、如果你的序列同源性不高，GC含量也还可以的话，可以使用一些经验性原则。比如
1. 寡核苷酸链退火温度用经验公式2x(A+T)+4x(G+C），一般用58度。不一定非是58
度，但用58度往往可以找到比较合适的序列。
2. 长度在18-21bases左右。
3. C、G含量40%-60%，分布比较均匀。
4. 3’端最后一个碱基最好是G或C，末尾不要有连续的GC。
5. 两条引物不会形成二聚体。
6. 单个引物不形成发夹结构。等等
这些原则在分子生物学书上有详细的介绍。
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