我在做PCR时,有好多的引物,Tm值在40-62之间,不知道用什么温度比较好.

我在做PCR时,有好多的引物,Tm值在40-62之间,不知道用什么温度比较好. 最近在做实验RT-PCR,我做RT-PCR,一对引物Tm值分别是52.2,54.6.目的片段1062,PCR反应条件怎么设置呀 PCR中Tm值的疑问我有一段引物，比如NNNNNN，然后我在这段引物前面加了标记，所以是XXXXXNNNNN，那么它的Tm值会有变化么？ 关于退火温度与引物Tm~我用PP5做的引物发现引物Tm值比退火温度低 这很奇怪啊,做PCR是不是退火温度一定要比Tm高呢? 同一模版DNA在进行PCR扩增时是不是需要不同的两种引物?为什么资料上说引物只要Tm值相似就行? 为什么做PCR设定引物退火温度时设定的退火温度要比合成引物得到的引物Tm值低几度? 我在做overlap PCR,两个片段一条736bp,一条255bp,20个重叠碱基,四个引物的TM值都是59度,两条都P出来了现在加入两端的引物,就是扩不出来1000的条带,这20重叠有13个是CG对,我不知道是不是退火温度的 在做RT-PCR时,或者是一般的PCR时,退火温度怎么设置,退火温度和Tm值之间有怎么样的关系? 为什么pcr 引物设计出来,下游引物加上酶切位点和保护碱基后,有一个Tm值是负值呀?还有,好多的Tm值都代表什么呢?引物Tm60多,二级结构的Tm达到40度有关系吗?G值有什么用 用基因组DNA做模板进行PCR扩增,设计引物所选序列也用cDNA为模板有什么不同是用这两个模板做pcr，在设计引物时，设计引物所用的序列有区别么 请教如何计算出兼并引物的退火温度我是一个新手,如何根据公司送来的兼并引物的单子上的Tm值推出实际PCR时的退火温度呢?引物单子上有两个Tm值,分别是1M 钠离子,50mM钠离子条件下的Tm值.实 PCR引物设计中,引物上是否需要每个碱基都与模板链结合?为了得到想要的Tm值,或是保证长度,不产生二聚体等,可不可以有在引物上添加一些不配对的碱基?如下图：可以的话,会对扩增有影响么? 我在做PCR时需要人体GAPDH或β -actin 引物,我能不能用手头现有的鼠的GAPDH或β -actin引物代替?人和鼠的引物不同吗? 人体内DNA复制需要引物吗?在做PCR时,需要添加相应的引物,那么DNA人体内复制需要引物吗? 设计PCR引物时Tm温度有没有具体要求?比如说,Tm必须小于72度,或大于72度? 引物的Tm值是什么 PCR中 两个引物的Tm值相差太大有什么害处? 如果从primer5中得到引物的tm 值怎么确定pcr温度