pET28A质粒双酶切后回收不到?用takara 的BamH1和Hind3双酶切pet28a(+)质粒,跑电泳切下目的带,用takara胶回收试剂盒回收酶切片段,回收后跑电泳,竟然什么也没有.回收之前量还可以啊,重复了好几次都

来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2024/11/25 22:06:04
pET28A质粒双酶切后回收不到?用takara的BamH1和Hind3双酶切pet28a(+)质粒,跑电泳切下目的带,用takara胶回收试剂盒回收酶切片段,回收后跑电泳,竟然什么也没有.回收之前量

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pET28A质粒双酶切后回收不到?
用takara 的BamH1和Hind3双酶切pet28a(+)质粒,跑电泳切下目的带,用takara胶回收试剂盒回收酶切片段,回收后跑电泳,竟然什么也没有.回收之前量还可以啊,重复了好几次都没成功,与其他基因片段一起回收,基因片段出来了,pet双酶切却还是没有.换了其他几个牌子的胶回收试剂盒也一样.
实在没办法就用DNA片段纯化的试剂盒来去除酶和BUFFER以及小片段等,结果还是回收不到.
这个太奇怪了.
酶切时间是1个小时左右,问题是和外源一起回收,外源回收得很好,就是Pet28a回收不到。

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虽然各家试剂盒都说自己的回收率有多高多高,但胶回收的效率本来就不高,我回收的东西基本上就没有能跑出来的,不知道是不是我用的琼脂糖有问题,但是能再连上,你在溶的时候少溶点水,20-30ul左右就够了,65度预热,离完一次后把溶液再吸上来再洗一次,能稍好一点,完了不用检,也检不出来,直接与片段进行连接转化就是了,一般都能长出来,虽然不多,可是一个斑就够了.

酶切时间?

pET28A质粒双酶切后回收不到?用takara 的BamH1和Hind3双酶切pet28a(+)质粒,跑电泳切下目的带,用takara胶回收试剂盒回收酶切片段,回收后跑电泳,竟然什么也没有.回收之前量还可以啊,重复了好几次都 pet28a作载体的重组质粒转入大肠杆菌怎么检测筛选,酶切位点是NdeI和XhoI,可以用氨苄青霉素或蓝白斑筛选?貌似没有抗氨苄青霉素基因啊 pet28a是低拷贝质粒,当插入GFP后,会不会影响pet28a-GFP的荧光蛋白强度? 关于表达质粒转化BL21(DE3)的问题用表达空载体pET28a和重组表达质粒pET4c9转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,在含有卡那霉素的琼脂平板上选择培养,挑取pET28a和pET4c9转化菌落,请教各位大侠,如果挑取? 用PCR扩大样但为什么用tiangen少量DNA回收试剂盒回收不到片段 为什么用IPTG诱导蛋白没表达?双酶切及PCR验证目的片段连到表达载体pET28a上了(所用的内切酶是BamH1,Hind111).重组质粒转化BL21,试了不同的IPTG浓度,诱导温度,就是没蛋白表达.后来重组质粒转化JM10 琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒和质粒抽提试剂盒用英文怎么写?要标准的 PBI121双酶切后回收不到我用的双酶切位点是SacⅠ和XbaⅠ,切开后的带的亮度还行,中孔的电泳我把三块胶切下来放一个管里回收的,回收试剂盒也是新的,用60微升洗脱,但是回收后再跑电泳就没有 pCAMBIA1301和目的基因质粒,都用Kpn I 和Xho I双酶切,回收后亮度挺好的,为什么连接转化总是不长 请问用PCR克隆已知基因的步骤中为何要将回收的目的基因重组在大肠杆菌质粒上去呢? 质粒或者胶回收试剂盒最后一步洗脱时用的是试剂盒自带的TE buffer还是去离子水? 如果胶回收后的质粒的浓度,在正常范围内,那么是不是说明我质粒酶切完全了? pcr回收试剂盒的吸附柱和质粒提取试剂盒的吸附柱一样吗? TA克隆构建IL24基因重组质粒 目的基因是从哪里获取的?构建重组质粒的方法是什么呢 英语翻译本文通过PCR、转化、提质粒、酶切、连主要接、纯化等步骤构建了质粒pET28a-NULP1.先通过PCR扩增出了nulp1,并将nulp1连接入pMD18-T载体酶切检测并测序,得到正确的nulp1,再将nulp1连接到pET-28 谁能告诉我TA的空间的背景音乐名称要原来的名字,TA上面写得名字搜不到 中国用哪个“ta”表示 分子生物学实验,DNA回收前电泳效果不错,但是回收后电泳检测不到然后DNA,有什么原因呢?用试剂盒做的,但具体的牌子不知道了