有关PCR引物设计好像引物设计好以后,还要添加什么保护碱基,有时还要添加酶切位点,这些东西添加进去后,不是无法和模板链连接起来了吗?除非是把引物设计的所有要求统一起来,在模板链上

来源：学生作业帮助网编辑：六六作业网时间：2024/12/28 22:03:18

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有关PCR引物设计
好像引物设计好以后,还要添加什么保护碱基,有时还要添加酶切位点,这些东西添加进去后,不是无法和模板链连接起来了吗?除非是把引物设计的所有要求统一起来,在模板链上下游重新找寻新位置得到合适引物.
我看了一个引物设计的实例,本来引物可以和模板链上下游碱基完全配对的,加了酶切位点后,那增加的几个碱基（酶切位点）就无法和模板连接起来,这到底是怎么回事?难道这样也能把所需基因扩增出来吗?为什么?

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当然引物能够完全和模板匹配最好,但是这种好事不是总是有的.
错配少数几个碱基并不会完全阻碍整条引物和模板的结合,少数服从多数嘛.
这就是引物设计时的博弈问题,鱼与熊掌不可兼得,就要选择最合适的.

只要加的保护碱基不是很多，降低温度是可以扩出来的。
匹配的部分完全没问题就行，头部多出来几个没有问题。

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