为什么我做Western,电泳时预染Marker很值条带也很清晰,但是转膜后膜上的预染Marker就变的很歪,非常歪.并且条带特别的不清晰,根本看不出条带!求教~

来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2024/11/17 03:32:44
为什么我做Western,电泳时预染Marker很值条带也很清晰,但是转膜后膜上的预染Marker就变的很歪,非常歪.并且条带特别的不清晰,根本看不出条带!求教~为什么我做Western,电泳时预染M

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你好!
我也做western有一段时间了
很高兴和你探讨下这个问题
我觉得该现象很可能的原因是转膜过程中出问题了,

1、转膜后的mark非常歪的原因是胶、膜以及滤纸(三明治组合)之间气泡没赶干净导致的.
2、而条带特别不清晰就得看你的转膜时间了:
转膜时间不够会导致胶上的蛋白包括mark没有完全转到膜上,
转膜时间长了会导致胶上的蛋白包括mark已经穿过膜到滤纸上了.
建议电泳后胶进行考马斯亮蓝染色、转膜后的膜进行丽春红染色以进行逐步检验问题出在哪.

western 做电泳前为什么要测蛋白浓度 western blot 电泳时为什么会跑歪 为什么我做Western,电泳时预染Marker很值条带也很清晰,但是转膜后膜上的预染Marker就变的很歪,非常歪.并且条带特别的不清晰,根本看不出条带!求教~ 为什么我做Western,电泳时预染Marker很值条带也很清晰,但是转膜后膜上条带都没有了marker是彩色转移缓冲液配比:甘氨酸(MW75.07) 2.9g,Tris(MW121.14) 5.8g,SDS 0.37g,甲醇 200ml,蒸馏水至 1000ml.转移 Western Blot 化学发光(ECL)为什么出现高背景?我做Western Blot,经常出现背景很多的现象, western blot 电泳液颜色有点略微偏黄是为什么?是否影响使用?刚换的甘氨酸与tris,western blot 电泳液的配方里什么可以引起电泳液颜色略黄,是否影响电泳~ 蛋白质电泳的目的虽然问题有点大 但我还是很想知道为什么要做蛋白质电泳 电泳究竟是检测什么东西 做western blot时为什么转膜后膜上没有蛋白?用marker标记 western blot转膜时 电流330mA,转膜1小时后 膜上没有marker的条带请问这是为什么呢? SDS电泳为什么被叫做SDS-PAGE? apoB做Western Blot转膜的时间我在做apoB100的Western,它的分子量是512kD,我老是做不出来,我想问问做出来的朋友们,你们用百分之几的SDS-PAGE胶跑的电泳,转膜的条件是什么? 请问western blot点样第一次做垂直式蛋白质电泳,在点样孔里点样,枪放在两玻璃板之间,向点样孔点样时为什么有时蛋白样流到旁边的点样孔,有时还漏到玻璃板后面?哪里出错了?写错了,是枪头 请教Western blotting!我要做WB检测凋亡蛋白bcl-2、fas、p53表达,请问能否在一张膜上加一抗时把三种蛋白的一抗都一起加?另外,做完SDS-PAGE电泳后用考马斯亮蓝染色检测电泳情况后的凝胶能否继续 western blot 显影使用ECL法,可以使用一般的凝胶成像仪吗,就是做核酸电泳用的那种仪器tanon G2500可以做western blot显影吗?只有白光和紫外光的. 用三氯乙酸-丙酮沉淀法提取杨树蛋白,电泳时无条带,不知道是什么原因,这个实验应该注意什么,电泳系统没问题,marker正常.第一次做这个实验,准备用提取的蛋白做Western. 在western blot中电泳时溴酚蓝为什么呈红色溴酚蓝是酸性指示剂,溶液pH=4.6呈蓝紫色,为什么本实验会呈红色? 求一Foxp3的 western blot 的结果.电泳图 Experion 全自动电泳系统能代替Western blot吗 双向电泳和WESTERN BLOTTING是属同一个实验吗?可不可以用双向电泳的胶条做WESTERN BLOTTING?