如何设计RT-PCR引物呢,请大侠们帮忙,说具体一些.新手,底子较弱!

来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/12/26 14:22:55
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是做反转录还是real time PCR?
反转录的话,可以用oligoT做反转录的引物,得到全部的cDNA,然后再利用特异性的引物去扩增出目的基因.或者直接用特异性的引物去反转录出来目的基因的cDNA,然后再进行PCR扩增.
引物设计的话,跟平常的引物设计应遵循的原则差不多.不过由于是扩增目的基因的coding sequence,所以引物设计的时候只能从coding sequence的两端设计,这样才能得到全长的目的基因.设计时,除了要与cDNA互补的一段外,还需要另外添加Kozac序列和酶切位点序列以及保护碱基,这样扩增出来的PCR产物就可以直接进行酶切连接,连入相应的载体上了.
real timePCR的话,同样根据需要扩增的片段设计引物就行了,没有位置的限制.

补充楼上，最好是在3'端。因为怕放转录效果不好

GENE BANK !!

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