做RT-PCR的时候为什么要设置标准反应体系和管家基因反应体系?还有就就是,为什么要制备用于绘制梯度稀释标准曲线的DNA模板?这些步骤在实验中有什么作用?

来源：学生作业帮助网编辑：六六作业网时间：2025/02/07 09:31:45

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做RT-PCR的时候为什么要设置标准反应体系和管家基因反应体系?还有就就是,为什么要制备用于绘制梯度稀释标准曲线的DNA模板?这些步骤在实验中有什么作用?
做RT-PCR的时候为什么要设置标准反应体系和管家基因反应体系?
还有就就是,为什么要制备用于绘制梯度稀释标准曲线的DNA模板?
这些步骤在实验中有什么作用?

做RT-PCR的时候为什么要设置标准反应体系和管家基因反应体系?还有就就是,为什么要制备用于绘制梯度稀释标准曲线的DNA模板?这些步骤在实验中有什么作用?
在做QRT-PCR时,一定要有内参,即在PCR时,每个标本都要做对应的内参,而且每次都是看家基因,一般用bate-actin,有时也用GAPDH.
内参的选择：普通PCR内参的大小没有多大要求,但real time一般选择300bp以下.
它的作用在于你提取的RNA逆转录成cDNA时,加入的浓度可能会不一致,即使用分光广度计测其浓度,也会有仪器误差,跑出的条带要进行灰度分析.用目的基因的积分光密度比上内参的光密度就是你这个基因实际表达的量.
希望对你有所帮助.

标准反应体系里面有引物，dNTP，Taq酶，等PCR所必须的东西，所以必须有反应体系，引物有可能形成二聚体，在PCR 过程中即可看到，一般位于MARKER最小带的上面（也就是说很小，是指引物之间互相配对儿），管家反应体系我不懂了……DNA模板梯度的设置时为了选取DNA模板最合适的浓度，浓度过低可能得不到结果，浓度过高则特异性不强，杂带会多...

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做RT-PCR的时候为什么要设置标准反应体系和管家基因反应体系?还有就就是,为什么要制备用于绘制梯度稀释标准曲线的DNA模板?这些步骤在实验中有什么作用? 最近在做实验RT-PCR,我做RT-PCR,一对引物Tm值分别是52.2,54.6.目的片段1062,PCR反应条件怎么设置呀 PCR为什么要在冰上操作?做PCR的时候,如加各个反应液Taq酶,引物,dNTP,模板,PCR buffer等要在冰(冰盒)上操作?初次操作,敬请答复. 定量RT-PCR需要设置不同的阳性和阴性对照,这是为什么? 为什么要做real-time pcr 标准曲线 PCR实验设置延伸反应的原因PCR实验设置延伸反应的主要原因是什么？为什么做PCR的时候要用PH8.0的双蒸水在做RT-PCR时,或者是一般的PCR时,退火温度怎么设置,退火温度和Tm值之间有怎么样的关系? 做RT-PCR的目的是什么? pcr扩增反应中设置延伸的原因荧光定量pcr做荧光定量pcr的绝对定量时为什么要构建标准质粒,利用质粒构建标准曲线,为什么不直接用DNA模板构建标准曲线呢? 做PCR如何设置条件 PCR反应温度怎么设置?由于刚刚开始做实验,什么都不懂,PCR引物的Tm值一条为50.6一条为54.3目标片段为195bp请问PCR反应程序该怎么设计啊? 反转录获得cDNA后,为什么还要做RT-PCR? PCR仪是如何控制温度的,为什么能在一定范围内想设什么温度就什么温度,不同温度间的设置怎么就没什么缓冲换句话就是,PCR仪的工作原理,注意不是PCR反应的原理做PCR以后,跑电泳.结果一条带都没有,为什么我们做的是RT—PCR,用的是琼脂糖凝胶电泳【求助】为什么做PCR要做β 【求助】为什么做PCR要做β