pMD19t载体连接片段后酶切,为什么切不掉?最后电泳还是两个条带?

pMD19t载体连接片段后酶切,为什么切不掉?最后电泳还是两个条带? 很大的质粒如何酶切连接,如载体13k,片段3k 为什么构建克隆载体不需T4连接酶为什么PCR扩增出的DNA片段和克隆载体pMD 18-T连接不需T4连接酶,而和表达载体连接就需要T4连接酶. 为什么载体和DNA片段都要酶切? 您好,将目的片段连接T载体后为什么要作感受态?目的是什么?T载体就是质粒吗,属性是什么? 目的基因片段与载体DNA连接的主要有? 目的片段连接表达载体后酶切出非特异带为什么我的载体11KB,连接了目的片段.PCR能扩出目的带,双酶切出现了三条带,一条载体,一条目的条带,一条非特异带3KB左右.载体上这两个酶只有一个酶 pMD19T载体的宿主菌有哪些,大肠杆菌DH5a能作为其宿主吗? 您好!目的基因跟载体片段连接后成重组质粒,那里面的那些溶液会影响接下来的酶切鉴定吗就是把目的基因和载体片段连接起来的那个连接体系里面的溶液,我接下来要坐酶切鉴定,会对其有影 载体与插入片段连接好后 进入宿主细胞转化 这个时候已经有了一次转化 为什么到后面又要转化呢?将载体与插入片段连接上之后,进入到宿主细胞转化：A：200ul感受态细胞加入连接产物后 轻 请问将载体与插入片段连接好后 进入宿主细胞转化 这个时候已经有个一次转化 为什么到后面又要用质粒转...请问将载体与插入片段连接好后 进入宿主细胞转化 这个时候已经有个一次转化 用T4连接酶做载体连接为什么一直连不上 目的基因与载体的体外连接.为什么目的基因要比载体多些? 表达载体的构建中目的片段与表达载体的连接最好是几个小时?时间长一点有什么影响么? 双酶切老是切不完全我PCR克隆了一段200bp的基因片段,然后连接到了T载体,引物2端各有EcoRI和HindIII的酶切位点,但现在将T载体进行双酶切,缺总是切不完全,只有大约1/3的载体被切开,所以200bp的条 转化pET32a一个菌落也不长是什么原因啊我在做分子克隆,克隆了四个片段,要在pET32a载体上表达,可是酶切,连接,转化大肠杆菌BL21以后一个菌落也不长,我已经试过各种载体和目的片段的比例,而 在我做的载体与片段连接中,在转化后,酶切后质粒是不长的,而重组后的长了,可是,最后结果却是.结果是,片段根本没有连进去,连进去的却是一个远远大于我的目的片段的碱基序列,这是为什么 我把一段140碱基的片段和载体GFP.c1酶连后,然后酶切跑电泳,条带上有140的条带,结果测序结果为空载体请问这是为什么啊?