3400bp的基因PCR时怎样设定程序,尤其是延伸的时间?求指教

来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2024/12/25 13:14:16
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这么长的PCR产物需要用特殊的Taq酶(如TAKARA的LA Taq,不知道这个酶是否换生产),普通的Taq酶一般延伸不到这么长.你需要根据Taq酶的延伸速度计算延伸时间(Taq酶的延伸速度一般是几百bp/min,你可以查查你用的Taq酶的延伸速度),延伸时间=产物长度/延伸速度,然后留一些冗余.3400bp至少需要延伸4-5min左右.

怎样pcr和这个是啥片段没什么关系。
你要先看你所用的酶的说明书,上面有该酶的热启动温度,变性温度,延伸温度等等,不同的酶都是不一样的。
如果酶的延伸速度是一分钟1kb,那么你就设3.5分钟,如果是半分钟1kb,就设2分钟,就这样。
退火温度是看你设计的引物,你把引物放到设计软件上看一看,调整一下buffer的离子浓度,看看退火温度是多少。
就可以了。...

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怎样pcr和这个是啥片段没什么关系。
你要先看你所用的酶的说明书,上面有该酶的热启动温度,变性温度,延伸温度等等,不同的酶都是不一样的。
如果酶的延伸速度是一分钟1kb,那么你就设3.5分钟,如果是半分钟1kb,就设2分钟,就这样。
退火温度是看你设计的引物,你把引物放到设计软件上看一看,调整一下buffer的离子浓度,看看退火温度是多少。
就可以了。

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延伸时间与所用的聚合酶有关,并且你的片段很大,最好选择可以用来扩增大片段的聚合酶,如果要有高保真度,推荐fastPFU

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