TA克隆全是阴性我把1400bp的片段连接到宝生物的PMD18-T载体上,转化后,全是白斑,但是挑了二十个全是空载体,

来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2024/12/23 16:08:17
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TA克隆全是阴性
我把1400bp的片段连接到宝生物的PMD18-T载体上,转化后,全是白斑,但是挑了二十个全是空载体,

TA克隆全是阴性我把1400bp的片段连接到宝生物的PMD18-T载体上,转化后,全是白斑,但是挑了二十个全是空载体,
首先 先确定你用的聚合酶是否能在末端加个A(一般都有)
其次 确定PCR产物是否按要求纯化,连接操作是否按说明来
然后 确定你正确的制备了感受态的大肠
再次 确定使用了抗性培养基,确定使用了iptg诱导
最后 虽然宝生物的载体比较好用,但是还是有转化率的问题...不过20全空.肯定是你的问题了

TA克隆全是阴性我把1400bp的片段连接到宝生物的PMD18-T载体上,转化后,全是白斑,但是挑了二十个全是空载体, PCR产物TA克隆,PGEM-T 载体+目的片段,那么转化挑克隆提取的质粒片段是多大?PCR产物TA克隆,PGEM-T 载体的序列是大约3000bp,PCR产物的目的片段是450bp,那么:经过连接、转化后挑单克隆,提取质粒,提 基因克隆先克隆出来的小片段怎么比全长基因大呢?先是从水稻里通过cDNA 克隆出来小片段基因是1873bp,最后测得全长基因是1715bp,是什么原因呢? PCR阴性对照始终有条带上一次PCR的阴性对照跑出来一条带.而且跟我的目标片段位置目测是一样的.我的片段大小加上两段引物,长度是160BP.大家都说是加错样了或者污染了.昨天特意到超净台里 怎么PCR克隆4500bp的DNA长片段想通过PCR设计引物克隆葡萄基因组DNA的4500bp的长片段,可资料上都写着,PCR克隆一般是2000bp,4500bp是不是太长了,能PCR出来吗 RT-PCR出一段目的基因,为什么要把它先TA克隆呢?为什么不能直接把它连接到相应的质粒上呢TA克隆的意义是什么呢?能否讲通俗点呢?如果不进行TA克隆,直接酶切连接到相应的载体上,再筛选阳性 我PCR产物大小141bp,纯化后,连接到pGEM-T载体克隆,使用M13通用引物,扩增片段长度是多少?我想知道假如用pGEM-T通用引物M13F 5'TGTAAAACGACGGCCAGT3'和M13 RV 5'CAGGAAACAGCTATGACC3'引物进行菌液PCR,扩增出的片段 大肠杆菌感受态细胞DNA转化,为什么没有克隆菌生长?以下是我的步骤:猪瘟疫苗216bp片段克隆 1、PMD-18T vector 1ul 216bp胶回收产物 4ul2、加入5ul的SolutionⅠ3、16℃连接过夜(大约20h)感受态细胞的DN TA克隆时,如何选择T载体?在三博克隆测序,PCR产物长度只有85bp,选择什么样的T载体比较好呢? 已知一段基因片段,如何克隆之前的片段,也就是如何克隆已知基因的启动子?启动子一般有多少BP? DNA分子克隆与PCR扩增DNA的区别T载体是克隆载体,能把目的基因片段转染到大肠杆菌扩增,但不表达.我新手弱弱的问一句为什么不直接把目的片段拿去跑PCR就行了,干嘛要用克隆载体去获得大量 关于 克隆的问题.假如我有有一个基因片段,未知序列.我可以把它连接到T载体,然后PCRPCR 用T载体PRIMER,然后测序,然后酶切出片段---------》从而达到得到很多此片段的目的.这个做法行么?或者别 目的基因未连接到克隆载体上这是为什么?我用的克隆载体是PMD-18! TA克隆的具体原理是什么? 构建的质粒,菌液PCR正确,质粒电泳却什么都没有,是怎么回事?我要将一个片段连接到载体上,片段长度:2588bp,载体:2686bp,是平末端链接,4度过夜,然后转化DH5a,蓝白筛选,用菌液PCR验证,引物用的 其ta的ta,是哪个ta? 我做的是双向测序,片段300bp左右.请问怎么在测序结果中找出引物?需不需要把某个片段或序列变方向之类的 乙型肝炎DNA检验结果为8.58X10的7次方我乙肝五项 鉴定全是 阴性的啊