双酶切的问题我们做是质粒用的双酶切,但是只有一条条带,有没有解决方法么,用单酶切可以么,还有乙醇沉淀法的操作,

来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2024/12/18 15:01:01
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双酶切的问题我们做是质粒用的双酶切,但是只有一条条带,有没有解决方法么,用单酶切可以么,还有乙醇沉淀法的操作,
双酶切的问题
我们做是质粒用的双酶切,但是只有一条条带,有没有解决方法么,用单酶切可以么,还有乙醇沉淀法的操作,

双酶切的问题我们做是质粒用的双酶切,但是只有一条条带,有没有解决方法么,用单酶切可以么,还有乙醇沉淀法的操作,
首先,你要确定你所切下来的目标条带的分子量大小.如果切下来的片段分子量小的话(小于1kb),经常会出现看不到的情况.因为从质粒上面切下来的片段摩尔数是和质粒一致的,在分子量很小的情况下,等摩尔数的小片段比质粒片段的质量要小很多,而一般的DNA染料(EB等)的荧光强度都是和质量呈线性关系的,所以很有可能因为片段质量太小而观察不到.如从11kb的载体上双酶切1kb的片段,那么载体片段和切下的片段质量比就是10比1,那么荧光强度也是10比1,如果你的原始酶切的质粒质量就不是很多,那么切下的片段就会根本看不到.解决这个问题的方法就是加大原始酶切反应体系中的质粒的浓度或者电泳时提高上样量.接着,还有一种可能就是两种酶的酶切效率相差甚远,一种酶活性非常好,一种酶则活性很弱,这样就会产生看不到酶切片段的情况.而造成这种情况,一般都是通用buffer没有选好,所以你要看两种内切酶的说明书,选择一种两种酶都具有很好活性的buffer进行酶切.实在没有很好的通用buffer,那么你需要延长酶切时间.
用单酶切不是不可以,但质粒自连的可能性会很大,这种情况下,你可以用碱性磷酸酶处理后再进行连接,但自连可能性还是有的.
醇沉法就是加入两倍体积的乙醇,然后在-20或者-70中放置15-30min,接着进行短暂低速离心(1-2Min,5000 rpm左右),弃上清,然后干燥.干燥后加入适当的水或者TE溶解就OK了.醇沉法回收DNA片段效率会很低,所以你要预先多准备一些DNA.

双酶切的问题我们做是质粒用的双酶切,但是只有一条条带,有没有解决方法么,用单酶切可以么,还有乙醇沉淀法的操作, 请问大肠杆菌一定有质粒吗?我们用来做转化的DH52有质粒吗我将DH52直接用来提质粒也能提得到,这是正常的吗? 生化实验做了质粒DNA的双酶切,实验用的是BamH1 和EcoR1 .实验老师课上还讲了结果.但是不让拷ppt.我们做出来的图好像有三条带子.想知道那三条分别是什么?有一个700多bp, 关于基因运载体的问题在基因工程中选择基因运载体,什么时候选择质粒,什么时候选择病毒我记得曾经做到过一道题目,他问的是运载体选择是质粒还是病毒,我那时候写质粒,但是他的标准答 重组质粒鉴定pcr没条带,酶切有条带我有两种重组质粒,两个基因片段大小一样,我的重组质粒都与空质粒大小相差300左右,但是用0.9%的胶140v电泳,无法区分大小,重组质粒进行双酶切,都出现了疑 高中生物问题┏ =☞大肠杆菌质粒上具有控制质粒DNA转移的基因?怎么理解,我们生物老师纯粹是神棍 转化后菌液pcr有目的条带,然后提质粒和双酶切验证.但是没有得到目的条带.1.提质粒最后一步用的是elution buffer而不是水,这样有什么影响,如果有影响,现在如何补救?2.28a空质粒的位置应 问一个基因工程问题我们做了一个基因工程的实验,大肠杆菌质粒DNA的提取,提取的DNA出现了蛋白质污染.然后我们用这个质粒DNA做了琼脂糖凝胶电泳.把DNA和loading Buffer混合后点样的时候总是漂 关于T-A克隆的一些问题我做完了T-A克隆,提取质粒以后,用我的目的基因引物做PCR,跑电泳跑出来了目的条带,但是有一些杂带,是怎么回事呢. 最近做了连接转化,挑平板上的菌落摇菌后提质粒,单酶切可以切开,而且质粒的大小明显小于空质粒然后用质粒稀释100倍后进行PCR,可以看到目的条带,但是有拖带.然后我继续将质粒稀释至500倍, 重组质粒进行双酶切鉴定时电泳结果显示对比质粒(就是重组质粒)的条带,在酶切后大、小片段的中间理论上不是应该对照质粒的条带在最后面的么?什么原因呀?质粒是用玻璃纤维住快速抽 关于慢病毒载体酶切问题我做慢病毒Psico的双酶切,是两个酶分别切的,为什么酶切产物跑电泳时,条带比没切过的质粒超螺旋位置要低?是的. 都说双酶切只能产生1种重组质粒,而且有的资料说单酶切产生的重组质粒是两个.为什么在2009年江苏高考34题中用双酶切时,答案却是两种重组质粒,而单酶切时产生的重组质粒是一个. 质粒和目的基因的问题(急)质粒被限制酶切了一个切口,而目的基因也用相同限制酶从DNA上切下.用DNA连接酶连接时,得到的重组产物中的质粒和质粒的结合,指的是一个质粒上两个粘性末端的 农杆菌质粒提取问题农杆菌,菌种C58,转进去的是一个PBI121的质粒,请问能把质粒提出来,并顺利酶切吗? 质粒酶切我最近在做连接,总是连不上,所以我想分析是哪步出问题.我想将酶切完的质粒载体与未酶切的质粒跑电泳看是否酶切成功,但不知道跑电泳能不能分辨出来(质粒大小10kb-12kb),如果可以 请问:做微生物质粒转化耐药试验的有关问题.请问:做微生物质粒转化耐药试验有否传染的危险? 我做了分子生物学实验,是质粒的重组,把外源基因插入到一个质粒里,这个质粒当中SPECT是标记物~~~我做了分子生物学实验,是质粒的重组,把外源基因插入到一个质粒里,这个质粒当中SPECT是标记