系统介绍一下GST-pulldown

来源：学生作业帮助网编辑：六六作业网时间：2024/11/22 13:28:29

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系统介绍一下GST-pulldown
GST亲和层析和GST Pull-down方法
此方法的基本原理是：利用重组技术将探针蛋
白与GST（Glutathione S transferase）融合,融合蛋
白通过GST与固相化在载体上的GTH（Glutathione）
亲和结合.因此,当与融合蛋白有相互作用的蛋白
通过层析柱时或与此固相复合物混合时就可被吸
附而分离.在病毒受体研究中,融合蛋白通常设计
为病毒吸附蛋白（VAP）.这方面成功的例子有
HBV[28].具体做法如下：将GST-融合探针蛋白
（VAP）和GTH-Sepharose制成亲和层析柱,然后待
分析的蛋白质混合液流经亲和层析柱,梯度洗脱,
分离、收集各蛋白组分,这称为GST亲和柱层析
（GST affinity column chromatography）.如果一开
始待检蛋白就和GST- 融合探针蛋白与
GTH-Sepharose一起共同孵育,经离心收集洗脱复
合物和洗涤后,再加入过量GTH获得相互作用蛋白
的复合物,那么这种方法则称为GST pull down.
GST亲和层析及相应的GST Pull-down方法的
优点是敏感,对混合物中的所有蛋白均“一视同仁”,
也可用于受体功能的鉴定.缺点是GST有可能影响
融合蛋白的空间结构,另外,蛋白质浓度对实验也
有一定影响.

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