ISSR为什么扩增不出条带我现在做的是ISSR-PCR,体系都已经优化完成,曾经P出了较好的带,但是最近不知什么原因,好多时候都是白板无带,只有Marker很清晰.25ul反应体系中,加入模板DNA 1ul (5ng)ISSR引

来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2024/12/25 23:35:37
ISSR为什么扩增不出条带我现在做的是ISSR-PCR,体系都已经优化完成,曾经P出了较好的带,但是最近不知什么原因,好多时候都是白板无带,只有Marker很清晰.25ul反应体系中,加入模板DNA1

ISSR为什么扩增不出条带我现在做的是ISSR-PCR,体系都已经优化完成,曾经P出了较好的带,但是最近不知什么原因,好多时候都是白板无带,只有Marker很清晰.25ul反应体系中,加入模板DNA 1ul (5ng)ISSR引
ISSR为什么扩增不出条带
我现在做的是ISSR-PCR,体系都已经优化完成,曾经P出了较好的带,但是最近不知什么原因,好多时候都是白板无带,只有Marker很清晰.
25ul反应体系中,加入
模板DNA 1ul (5ng)
ISSR引物 1ul (约5pmol)
10xPCR Buffer 2.5ul 内含镁离子
dNTP 1ul (2.5mM)
Taq酶 1单位(U)
加ddH2O 至 25ul
PCR退火温度在48-56之间.Taq酶,dNTP是新的,模板也重新提过,跑总DNA条带也很亮,用的引物别人拿去可以扩增.我现在做大多数时候都是白板无带,我很郁闷,

ISSR为什么扩增不出条带我现在做的是ISSR-PCR,体系都已经优化完成,曾经P出了较好的带,但是最近不知什么原因,好多时候都是白板无带,只有Marker很清晰.25ul反应体系中,加入模板DNA 1ul (5ng)ISSR引
可能是小问题导致,比方说你的EP管里是不是有杂质,你的加样枪是不是漏气什么的……实验做不出来就要怀疑一切,包括你的试剂是不是被别人动过了
建议同样的体系,请别人替你做一遍,看看能不能出来结果

ISSR为什么扩增不出条带我现在做的是ISSR-PCR,体系都已经优化完成,曾经P出了较好的带,但是最近不知什么原因,好多时候都是白板无带,只有Marker很清晰.25ul反应体系中,加入模板DNA 1ul (5ng)ISSR引 一个引物PCR扩增出的多个条带为什么亮度会不同?用ISSR标记分析遗传多样性,一个引物的PCR扩增结果可以有多个条带,为什么有的条带很亮,有的条带就不太亮? 关于ISSR引物我现在打算做ISSR扩增,我有100个样品,但是不知道该购买多少引物,以及该买哪些序列的引物,希望大家能帮帮忙给个意见,我的100个是我提的DNA样品,不是引物。我还没买引物,你的 基因的PCR扩增实验扩增不出DNA条带是什么原因? pcr扩增没有条带我用别人肯定能作出来的ISSR体系扩增之后为什么什么条带都没有呢,感觉药品应该没有问题.将DNA稀释100倍后用紫外分光光度计测DNA od260/280 1.8左右,符合要求呀,电泳检测只是轻 ISSR标记,总是扩增不出来,我做ISSR标记,下面是我提取基因组DNA的图片,我曾经用这些模板扩出来比较好的条带来,可是等我把所有样品的DNA全提取完成,再去做PCR的时候,就发现问题严重了.有时候 ISSR扩增的多态性条带怎么统计?如用10 个ISSR 引物共扩增到600 条带,其中多态 性条带有250 条,请问这个总带数600和多态性条带的300是如何统计的?即哪些属总带统计的范围,哪些属多态性带统计 现在在做5,RACE.扩增出目的条带后胶回收,然后用特异性引物去嵌套验证,结果也有目的大小的条带扩增出来回收的片段1K左右 PCR扩增不出来条带的原因? T载体连接问题现在在做5,RACE.扩增出目的条带后胶回收,然后用特异性引物去嵌套验证,结果也有目的大小的条带扩增出来,这应该可以说明胶回收的目的片段是正确的.但是用T载体连接后转化到 PCR ISSR 条带很少,而且不清楚看文献上做的很多条带,同样体系为啥,我的就最多4调 我做的是分子鉴定真菌,用的是通用引物ITS1和ITS4,pcr扩增后只有marker有条带,其他的都没有是什么原因.另外一个真菌能扩增出来条带 做逆转录PCR,扩增出的条带怎样区分是残留基因组DNA还是反转录得到的cDNA得到的结果 PAGE电泳条带该如何分析?这是我用MSAP(甲基化敏感扩增多态性)跑出的PAGE电泳条带,感觉条带很不清晰背景色也很重。不知道该如何分析希望各位大虾指导。不甚感激! PCR 空白都能P出来 是怎么回事?我用 338f 518r 扩增 16S rDNA V3片段 为什么 不加DNA模板 都能P出很亮的条带,是因为污染了吗,可是我尽量保证无菌(在无菌操作台操作,没在无菌室操作)做了很多次 PCR不能扩增出目的条带,用的是文献中提供的引物总是扩增不出来,目的片段279bp,我用的条件是94℃,5min;94℃,30s,50℃,30s,72℃,45s,30个循环;72℃,5min.其中退火温度有试过56℃,58℃,都不行,只有引 如何增加PCR产物?我得PCR扩增循环数是30个,扩增体系是15微升,其中NTP的浓度是1.5,引物和酶都是1,模板是1.2,镁离子的浓度是1.0.能扩出目的条带,但是琼脂糖电泳条带不是很亮,即目的条带的量不 mtDNA进行pcr扩增 25微升体系的电泳结果全部都出想要的一条亮带 但是做了50微升体系的之后跑电泳 许多不出条带 要不就是有拖带 这种情况是怎么回事